20_S_人参皂Rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响.docVIP

20_S_人参皂苷Rh_2对人结肠癌细胞增殖和周期的影响 ±S）表示，组间分析比较采用t检验，P0.05表示差异有统计学意义。 结果 3.1 20（S）-G-Rh2对Caco-2和HT-29细胞增殖的影响 二乙酸荧光素（FDA）可透过细胞膜并脱脂释放荧光素积累在活细胞中，激发和发射波长分别为488nm和530nm，常用于检测细胞存活率。本研究采用FDA为荧光指标剂建立了微孔板法进行20（S）-G-Rh2对人结肠癌细胞Caco-2和HT-29的增殖影响研究。结果显示，20-（S）-G-Rh2对Caco-2和HT-29细胞增殖具有明显的抑制作用，其抑制作用随药物浓度而增强，呈现较好的剂量依赖性。计算药物对HT-29和Caco-2细胞的半数抑制率（IC50）分别为19.68μg/mL和25.79μg/mL。（结果如表1，图1、2）。 3.2 显微镜观察细胞形态学变化 20μg/mL 20（S）-G-Rh2处理48h后的HT-29细胞较空白对照组细胞成群贴壁生长、细胞透亮，折光性好。而给药组细胞之间互相脱离，颜色加深，贴壁细胞数量减少，细胞轮廓消失。（见图3）。 3.3 20（S）-G-Rh2对HT29细胞周期的影响 20（S）-G-Rh2处理24h后细胞，用流式细胞仪检测细胞周期各时相细胞数。结果显示;20μg/mL 20（S）-Gh2处理24h后HT-29细胞在细胞周期的分布发生娴熟性的变化。对照组G0/G1期、G2/M期、G2/M期、S期细胞比例分别为（76.78±4.0）%、（3.61±2.1）%和（19.60±3.59）%、（0.8±1.21）%及（54.54±2.17）%：给药组20（S）-G-Rh2的G0/G1期和G2/M期细胞比例明显的减少，S期细胞比例升高，与对照组有显著性差异（P0.05），具有统计学意义，（建表2，图4）。 4 讨论 结肠癌是胃肠道中常见的恶性肿瘤，临床主要以手术治疗并术后放疗和化疗为主要治疗手段，但对晚期效果不佳。人参皂苷是人参的主要生物活性成分，人参皂苷单体中G-Rh2具有抑癌活性，并对正常组织毒性甚低。目前体内外实验结果表明：通过对细胞周期的影响，诱导细胞凋亡，从而时间和剂量依赖性的抑制多种多种肿瘤细胞的增殖。但20（S）-人参皂苷Rh2对人结直肠癌细胞Caco-2和HT-29的研究还未见到报道,因此本研究通过体外培养人结肠癌细胞Caco-2和HT-29细胞，考察20（S）-G-Rh2对人结肠癌细胞的凋亡及细胞周期的影响做初步的探究。本研究结果表明，20（S）-G-Rh2可抑制人结肠癌细胞Caco-2和HT-29细胞生长，且这一变化在实验范围内存在剂量依赖性，其IC50分别为19.68和26.79μg/mL。显微镜下现实：当一定剂量的20（S）-G-Rh2作用48h后的人结肠癌细胞HT-29出现明显的细胞死亡形态。肿瘤的发生是一个多步骤、多因素、多阶段改变的过程，其中细胞周期调控失控被认为是肿瘤发生的重要机制。细胞凋亡可发生在细胞周期的各个时相。采用流式细胞分析技术进行细胞周期研究，结果显示：20（S）-G-Rh2能显著减少HT-29细胞的G0/G1期和G2/M期细胞比例，增加S期细胞比例，说明20（S）-G-Rh2可阻滞人结肠癌细胞HT-29于S期。与β-拉帕醌阻滞结肠癌细胞SW480、SE620和DLD-1于S期进而导致凋亡的机制相同。综上所述，20（S）-G-Rh2可抑制人结肠癌Caco-2和HT-29细胞增殖，其抑制作用主要是由于其可阻滞细胞处于S期，S期为DNA辅助器，大量的DNA在此期间解旋复制，暴露活性位点，为化疗药物提供更多的靶点。20（S）-G-Rh2可阻滞结肠癌细胞于S期导致凋亡，可与阻滞细胞于G0/G1或G2/M期的化疗药物联合治疗结肠癌。但其确切的分子机制将有待于进一步探讨，20（S）-人参皂苷-Rh2单体将在临床防止肿瘤方面具有广泛的应用前景。 Learn General Secretary on two to learn a strengthening four Consciousnesses important speech caused a strong reaction in the country. 　　Time, watching red treasure, the origin of building the party back to power, how to strengthen services for the masses, improve party cohesion, fighting to become the grass-roots party members and masses hot topic. G