抗性淀粉试剂盒明书.docVIP

抗性淀粉检测试剂盒 K-RSTAR （100次分析） 前言 抗性淀粉（RS）是指在人小肠内不能被酶解的淀粉，在大肠部分或完全发酵。RS是总膳食纤维的组分之一。 原理（AOAC法 2002.02 ;AACC法32-40） 抗性淀粉的测定方法： 样品使用α-胰淀粉酶和淀粉葡糖苷酶淀粉葡糖苷酶麦芽糖苷氨基安替比林））连续分配器 4.连续振荡，37℃孵育，精确孵育时间为16小时。（备注：200里程/min） 5.把试管从水浴锅中拿出，用纸巾擦掉多余的水。拿开盖子，加入4.0mL乙醇（99% v/v）或者IMS（99% v/v），用涡旋器涡旋。 6.1500g离心，10分钟（不加盖） 7.小心倒出上清，加入2mL 50%乙醇或50% IMS重悬浮，用涡旋器涡旋，再加入6mL 50%IMS，混合，1500g离心，10分钟 8.小心倒出上清，重复上述重悬浮和离心步骤。 9.小心倒出上清，翻转试管，用纸巾吸除多余的液体。 （b）测定抗性淀粉含量 1.将试管冰浴，再向每个试管中加入磁力搅拌棒和2 mL2M的KOH，用磁力搅拌机在冰浴/水浴状态下搅拌20min，以重悬浮絮状物和溶解RS。 如下图所示： 备注： （1）不要使用涡旋器混匀，那将会导致淀粉乳化。 （2）确保边加入KOH溶液边剧烈搅拌试管里的样品。这将会避免形成难溶的淀粉块。 2.向每个试管中加入8 mL1.2M的醋酸钠缓冲液（pH3.8），并用磁力搅拌机搅拌。立即加入0.1mLAMG（溶液1；3300U/mL）,混匀，并放入50℃水浴。 3.孵育30min,期间用涡旋器间歇混匀。 4.对于RS含量10%的样品，用水洗瓶定量转移试管里的样品至100mL容量瓶，当用洗瓶洗涤试管中的溶液时用外磁铁保持试管中的磁力棒。用蒸馏水定容至100mL，并混匀。以单位体积离心溶液，1500g，10min。 5.对于RS含量10%的样品，直接离心1500g,10min（非稀释）。对于这些的样品，试管里的最终体积大约为10.3mL（体积可能会变化，如果分析的是湿样，在计算数值时应注意折扣） 6.将稀释的（4.）或非稀释的（5.）上清液以0.1mL为单位转移至玻璃试管（16×100mm），一式两份，加入3.0mLGOPOD试剂（溶液4），50℃孵育20分钟。 7.测量每一个溶液的在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。 制备空白试剂 准备空白试剂：通过混匀0.1mL的100mM的醋酸钠缓冲液（pH4.5）和3.0mL的GOPOD试剂 制备D-葡糖糖标准品（一式四份）通过混合0.1mLD-葡萄糖（1mg/mL）和3.0mL的GOPOD试剂制备D-葡糖糖标准品。 （c）计算非抗性（可溶性的）淀粉 1.收集起始孵育[(a)7.]过程中离心获得上清液和两次50%乙醇洗涤[(a)8.和9.]获得的上清液至容量瓶中。用100mM的醋酸钠缓冲液（pH4.5）定容至100mL。混匀。 2.以0.1 mL为单位孵育溶液（一式两份）并加入10μL稀释的AMG溶液(300U/mL), 50℃孵育20分钟,加入3.0 mL GOPOD试剂（溶液4），50℃孵育20分钟。 3.计算在510nm下相对于空白试剂的吸光度值。 4.计算非抗性淀粉的含量。 计算 计算样品中抗性淀粉含量，非抗性淀粉含量和总淀粉含量（%，在干重的基础上），计算模板如下： 抗性淀粉（g/100g样品）（样品包含10%RS） =⊿E×F×100/0.1×1/1000×100/W×162/180 =⊿E×F/W×90 抗性淀粉（g/100g样品）（样品包含10%RS） =⊿E×F×10.3/0.1×1/1000×100/W×162/180 =⊿E×F/W×9.27 非抗性淀粉含量（g/100g样品） =⊿E×F×100/0.1×1/1000×100/W×162/180 =⊿E×F/W×90 总淀粉含量=抗性淀粉含量+非抗性淀粉含量 ⊿E=相对于空白试剂的吸光度值 F=从吸光度值到微克的转换（在GOPOD反应中100μgD-葡萄糖的吸光度值是确定的，F=100（D-葡萄糖的μg数）除以这100μgD-葡萄糖的GOPOD吸光度值） 100/0.1=体积校正（从100mL取0.1mL） 1/1000=从微克到毫克 W=分析样本的干重 =重量×（100-含水量） 北京博欧实德生物技术有限公司 | manufacturers drawings bolt fastened in the cylinder and outer cylinder. Cylinder cylinder in the drain pipe installation and measuring component leads.