坐骨神经—腓肠肌标本的制.docVIP

一、实验目的： 1. 学习生理学实验基本的组织分离技术。 2. 学习和掌握制备蛙类坐骨神经-腓肠肌标本的方法。 3. 学习与肌肉收缩之间的关系蛙类的一些基本生命活动和生理功能与恒温动物相似，若将蛙的神经-肌肉标本放在任氏液中，其兴奋性在几个小时内可保持不变。若给神经或肌肉一次适宜刺激，可在神经和肌肉上产生一个动作电位，肉眼可看到肌肉收缩和舒张一次，表明神经和肌肉产生了一次兴奋。在生理学实验中常利用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性；刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征等，制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的一项基本操作技术。对于单根神经纤维或肌纤维来说，对刺激的反应具有“全或无”的特性。神经-肌肉标本是由许多兴奋性不同的神经纤维（细胞）-肌纤维（细胞）组成，在保持足够的刺激时间（脉冲波宽）不变时，刺激强度过小，不能引起任何反应；随着刺激强度增加到某一定值，可引起少数兴奋性较高的运动单位兴奋，引起少数肌纤维收缩，表现出较小的张力变化。蛙的坐骨神经肌肉标本单收缩的总时程约为0.11 s，其中潜伏期、缩短期共占0,05 s，舒张期占0.06 s。若给予标本一连串的最适刺激，则因刺激频率不同会得到一连串的单收缩、不完全强直收缩或完全强直收缩的复合收缩肌槽、张力换能器（g）、计算机生物信号采集处理系统；普通剪刀、手术剪、眼科镊（或尖头无齿镊）、金属探针（解剖针）、玻璃分针、蛙板（或玻璃板）、细线、培养皿、滴管、双凹夹。破坏脑、脊髓剪除躯干上部、皮肤及内脏 ⑤．辨认蛙后肢的主要肌肉 ⑥．游离坐骨神经和腓肠肌 ⑦．剪去多余的脊柱和肌肉 完成坐骨神经腓肠肌标本 检验标本　-腓肠肌活动的影响 ①标本放置：将蛙肌板，张力换能器均用双凹夹固定于支架上；标本的股骨残端插入蛙肌板固定小孔内并固定；腓肠肌跟腱上的连线连于张力换能器的应变片上，坐骨神经轻搭在蛙肌板的刺激电极上。 ②测定阈强度：单脉冲刺激方式,波宽调至并固定在1 ms，刺激强度从零开始逐渐增大；首先找到能引起肌肉收缩的最小强度，该强度即是阈强度。描记速度要求每刺激一次神经，都应在记录纸或屏幕上记录（或显示）一次收缩曲线（应为一短线）。将刺激强度逐渐增大，观察肌肉收缩幅度是否随着增加，记下的收缩曲线幅度是否也随之升高继续增大刺激强度，直至连续3～4个肌肉收缩曲线的幅度不再随刺激增高为止，读出刚刚引起最大收缩的刺激强度，即为最适刺激强度。　刺激频率对肌肉收缩的影响以波宽为1 ms,从最小刺激强度开始逐渐增加刺激强度对肌肉进行刺激, 找到刚刚引起肌肉最大收缩的刺激强度,即为该标本的最适刺激强度,整个实验过程中均固定在此刺激强度上（一般为5～7.5 v）。　　用单刺激作用于坐骨神经，可记录到肌肉的单收缩曲线。　　用双刺激作用于坐骨神经，使两次刺激间隔时间为0.06～0.08s,记录复合收缩曲线（纸速25～50? mm/s）。将刺激方式置于“连续”，其余参数固定不变，用频率为1、6、 10、15、20、30? Hz的连续刺激作用于作用于坐骨神经，可记录到单收缩、不完全强直收缩和完全强直收缩曲线 纸速2～10 mm/s 。坐骨神经-腓肠肌标本制备 制备好标本（如上图），该标本保留小段脊髓、股骨，坐骨神经连接脊髓和腓肠肌。用沾有任氏液的锌铜弓触及一下坐骨神经腓肠肌发生迅速而明显的收缩，说明标本的兴奋性良好。-腓肠肌标本一次阈上刺激（强度：450 mv；波宽： 5 ms），腓肠肌发生一次单收缩，其潜伏期为16 ms，收缩期为 88 ms,舒张期为350 ms。（记录结果见表1、图1） 表1：骨骼肌单收缩各期的结果：（单位：ms） 骨骼肌单收缩 潜伏期 收缩期 舒张期 时程 ms 16 88 350 图1：骨骼肌单收缩的分析 A-B：潜伏期B-C：收缩期C—D：舒张期 （50ms/Div） 3、刺激强度对肌肉收缩的影响： 刺激青蛙的腓肠肌时,不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。当刺激强度在0.15V（不包括0.15V）时以下时，没有引起肌肉收缩反应；当给予腓肠肌0.15V的刺激强度时，肌肉刚好能引起肌肉发生收缩反应，肌肉的收缩力大约为0.12g；当刺激强度在0.15 V 0.45时，随着刺激强度的增加肌肉收缩的力量逐渐变大，收缩力在 0.12-3.8g之间；当刺激强度在0.45V以上时，即使再增加刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之增大，肌肉收缩力维持在4.8g的水平上。综合实验结果，我们得知0.15V（不包括0.15V）以下的刺激是是阈下刺激，0.15V是阈刺激，0.45V是引起青蛙腓肠肌发生收缩反应的最适刺激强度。实验结果见表2和图2。 表2：青蛙腓肠肌刺激强度与骨骼肌收缩反应的关系 刺激强度（V） 0.15 0.15 0.15 V 0.45 0.45 肌肉收缩力