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吕 叔 湘 中 学 教 师 备 课 纸 高 二 年级 生物 学科 时间 第6周 编号（2） 课题 专题1 基因工程 第2节 基因工程的基本操作程序 课标考点 1、简述基因工程原理及基本操作程序。 2、尝试设计某一转基因生物的研制过程。 重点难点分析 重点：基因工程基本操作程序的四个步骤。 难点：（1）从基因文库中获取目的基因。 （2）利用PCR技术扩增目的基因。 教学方法 讲述、启发 课型 新授课 教学过程设计要求 书面作业布置 板书设计 教学后记 教学过程设计 【导入】 『基础知识』 一、目的基因的获取： 1．目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。 2．获取目的基因的方法 1 从基因文库中获取目的基因 ①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库：含有一种生物的 基因 ②种类 cDNA文库：含有一种生物的 基因 ③目的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因的 ，基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 2 利用PCR技术扩增目的基因。 ①PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 ②条件：已知目的基因的 序列。 ③过程：目的基因DNA受热形成 ，与 结合，然后在_________的作用下进行延伸形成DNA。（变性—复性—延伸） ④方式：指数扩增 2n n为扩增循环的次数 ⑤原理： 3 人工合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。（DNA合成仪） 二、基因表达载体的构建 1．表达载体的组成：目的基因+ + +标记基因等。 2．启动子：位于基因的 ，它是 和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 3．终止子：位于基因的 ，终止 。 4．标记基因： 受体细胞是否含有目的基因。 5．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代；同时使目的基因_________________和发挥作用。 6．不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。 三、将目的基因导入受体细胞 一 转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和 过程。 二 方法 1．将目的基因导入植物细胞 1 农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染 植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 ②转化：目的基因插人 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 2 基因枪法 基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 3 花粉管通道法 花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我的的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的） 2．将目的基因导入动物细胞 1 方法： 注射技术。 2 操作程序：目的基因表达载体 →取卵 受精卵 →显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到____性动物的_______________________________内发育→新性状动物。 3．将目的基因导人微生物细胞 1 原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 2 大肠杆菌最常用的转化方法是： 处理细胞→ 细胞→表达载体与感受态细胞混合→ _________ 细胞吸收DNA分子。 四、目的基因的检测与鉴定 1．分子检测 1 方法：DNA分子杂交技术、抗原抗体分子杂交方法。 2 内容 ①检测转基因生物染色体的DNA是否插入 。 ②检测目的基因是否转录 ③检测目的基因是否翻译成 。 2．个体水平鉴定： 鉴定、抗病鉴定等。 【典型例题】 例1、下列获取目的基因的方法中需要模板链的是 ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ 例2、科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子 抗虫基因首端 ，导人棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子 抗虫基因末端 ，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。由以上过程推知，作为目的基因的运载体应具备的结构是 A．目的基因、启动子 B．目的