RNA在病原微生物检测中的应用.pptVIP

SFDA唯一批准可用于尿液检测的核酸试剂 对女性同一患者的尿液样本和宫颈拭子样本同时检测与尿液和阴道拭 同时检测SAT检测结果对比分析如下 尿液和阴道拭子MG-SAT结果 合计 阳性 阴性 尿液和宫颈拭子MG-SAT结果 阳性 39 4 43 阴性 5 249 254 合计 44 253 297 女性同一患者样本一致性符合率=(39+249)/297*100%=96.97% SAT检测利于用药监测与判愈 RNA很快降解 用药监测和判愈 提高医院诊疗水平 降低患者诊治成本 检测方法 可否监测 原因 镜检法 否 不能判断是否活菌 培养法 是 尽管活菌才能培养，但灵敏不足 金标法 否 假阴性率偏高 PCR 否 有效治疗后,细菌DNA至少需要3周降解 SAT 是 有效治疗后,细菌 SAT—MG检测给临床带来意义 特点 获益 兼顾拭子及尿液样本检测 1扩大了患者类型（孕妇、未婚女性及未成年人） 2减轻病人痛苦，保护隐私（男性患者） 3降低了医生的工作量 4无创式取样，减少取样带来的风险 靶标为16SrRNA 灵敏度高、特异性强，保证了结果的准确性，提高了医院的诊疗水平，避免了诊断错误带来的医疗纠纷 病原体死亡，RNA很快降解: 与临床相关性好 1可以区分“死菌”、“活菌” 2避免了结果假阳性的过度治疗，减少了抗生素滥用 3降低了患者的治疗成本 4为医生临床判愈提供指导 2.5个小时出结果 为医生快速诊断提供依据，方便医生及时治疗，减轻病人痛苦 结论 取样方便、自动化操作、准确性高是病原体分子诊断的发展趋势。 RNA诊断技术，包括SAT，应用于病原微生物检测具有明显的优势。 我们预期，在接下来的十年里，RNA诊断技术将对传染病的诊断带来革命性的变化。 * * SAT的第三个特点是利于用药监测和判愈。由于SAT检测的是病原体的RNA。 有效用药之后，病原体死亡，RNA在2-3天内就会降解，因此SAT是活菌检测技术，其检测结果可用作用药监测和判愈。 对于医院而言，可提高其整体的诊疗水平，对病人而言，则避免了反复就诊，可降低诊治成本。 而胶体金，其灵敏度过低，结果不能用作药效监测的依据。 PCR检测的是DNA，有效用药之后，病原体虽然死亡，DNA的降解需要至少3周，因此PCR的结果也不能作为药效监测的依据。 所以可以说SAT填补了病原体检测方法在用药监测和判愈这一块的空缺。 先讲SAT，再讲其他 RNA在病原微生物检测中的应用  摘要 主要分子检测技术原理及差异 RNA扩增技术用于病原体检测的优势 国内外病原体检测现状 RNA扩增技术在临床中应用 小结 摘要 主要分子检测技术原理及差异 RNA扩增技术用于病原体检测的优势 国内外病原体检测现状 RNA扩增技术在临床中应用 小结 病原体检测方法分类 分子诊断概念和特点 概念：利用标本中的核酸作为检测对象，对感染性疾病、肿瘤、遗传性疾病等进行诊断和预后判断的方法。 特点： 特异性高、灵敏度高 诊断范围广、适应性强 什么是核酸？ 链状分子 DNA (脱氧核糖核酸) 贮存遗传信息 RNA (核糖核酸) 传递遗传信息 遗传信息的传递途径 DNA RNA 蛋白质 转录 逆转录 DNA vs. RNA（一） DNA是双螺旋结构，RNA是单链结构 DNA很稳定，RNA很不稳定 DNA vs. RNA（二） 有些RNA在细胞中拷贝数很多 一个或几个拷贝DNA 104核糖体RNA (rRNA) 16S rRNA 23S rRNA 使用rRNA为靶标，可以大大提高了取样效率和检测灵敏度。 常见的RNA检测技术 NASBA（国外） TMA（国外） SAT（国内） SAT技术原理 ① ② ③ ④ 同一温度下，首先通过M-MLV反转录酶产生靶标核酸（RNA）的一个双链DNA拷贝。 然后利用T7 RNA多聚酶从该DNA拷贝上产生多个（100～1000个）RNA拷贝； 带有荧光标记的探针和这些RNA拷贝特异结合，产生荧光。该荧光信号可由荧光检测仪器实时捕获，直观反映扩增循环情况； 同时，每一个RNA拷贝再从反转录开始进入下一个扩增循环。? SAT与PCR技术原理比较 RT RNA cDNA RT ~1000 copies T7 SAT DNA Taq Taq PCR 30分钟内 扩增1010倍 RNA DNA SAT配套仪器(全自动工作站) 样本---提取纯化RNA--- 酶反应混合液（一体化） 全封闭 生物安全性好 快（48个样本/2.5小时） 摘要 主要分子检测技术原理及差异 RNA扩增技术用于病原体检测的优势 国内外病原体检测现状 RNA扩增技术在临床中应用 小结 DNA用于临床检验的不足 “死菌检测也阳性”，与临床相关性差 基因型与表型不