表面疏水1重点.docVIP

真菌疏水蛋白表面展示对毕赤酵母细胞疏 性及共展示南极假丝酵母脂肪酶B的影响 【摘要】酵母表达系统是近年发展迅速、应用广泛的一种真核细胞表达系统。基于毕赤酵母细胞开发的表面展示系统利用细胞壁蛋白将目的蛋白展示表达在细胞表面，既具有其表达效率高，培养成本低的优点，也具有表面展示系统产品回收方便，易于重复利用等优点，因此具有广阔的应用前景。为了提高酵母菌体表面疏水性，使其更好的在催化反应中发挥活力，本论文将真菌疏水蛋白展示在细胞表面，并评价疏水蛋白展示表达对细胞表面疏水性及共展示的CALB催化性能的影响。具体研究内容及结果如下：（1）疏水蛋白在酵母表面展示表达本研究构建了表面展示疏水蛋白HFBI的重组酵母ZfH21和展示疏水蛋白SC3的重组酵母ZfS21。通过Western Blot分析证实 “疏水蛋白-Gcw21”融合蛋白通过GPI锚定到酵母细胞壁，而免疫荧光实验证实了细胞表面存在该融合蛋白，且测定了细胞表面展示的疏水蛋白数量。结果发现ZfH21表面展示的疏水蛋白HFBI数量比ZfS21展示的SC3高52%。对细胞表面疏水性的测量发现ZfH21表面的疏水性比对照Z21提高8.0倍，而ZfS21表面疏水性比对照Z21提高6.3倍，进一步证实了疏水蛋白在ZfH21和ZfS21细胞表面的功能性展示表达。（2）疏水蛋白与CALB共展示表达本文首次对疏水蛋白CALB脂肪酶在酵母细胞表面共展示进