液相色谱系统的维护及注意事项.doc

液相色谱系统的日常维护及注意事项 仪器安装条件与注意事项 1、?安装本仪器的实验台应水平、稳固、并具有足够的放置空间。避免在具有腐蚀性气体、大量灰尘或能产生强磁场的地方安装本仪器，否则将会影响仪器的正常运转及缩短仪器的使用寿命。 2、?由于仪器所用溶剂是易燃并且有毒，故安装设备的房间应通风良好，应具有向外排风的装置，否则可能引起中毒或身体不适，也可能会引起火灾。 3、?应安装四个以上三芯电源插座（220V，5～10A），必须具有专门的接地线（注意，绝不能将电源线的中线作为接地线），并确保输出电源的电压稳定，否则会导致仪器的不正常运作。如果实验室无专用接地线，一般可用φ15～20mm的铜棒打入地下1～1.5米，用φ1.2mm左右的塑胶单股导线连接到电源插座的接地端。 4、如果实验室电压不稳定，应使用稳压器等必要设备，使电源电压稳定。 5、实验室的室温应控制在15℃～30℃范围内，并且波动要小；湿度在45～80%范围内。 6、由空调或其他设备产生的气流不要直吹仪器，避免光线直射及振动。 仪器的启动顺序：先开高压恒流泵和紫外检测器，待紫外检测器自检完毕，回到默认波长254nm后，再开计算机及打开工作站软件。 仪器关闭顺序：先按泵停止，关闭氘灯，退出工作站软件，然后再关仪器。 仪器应由专人负责，如果使用人员不固定，请准备《仪器使用登记本》，以明确使用情况，及时处理和保养。 液相色谱系统的日常维护及注意事项（之二） 流动相使用的注意事项 必须使用HPLC级或相当于该级别的流动相，并要先经0.45μm薄膜过滤。 过滤后的流动相必须经过充分脱气，以除去其中溶解的气体（如02），如不脱气易产生气泡，增加基线噪声，造成灵敏度下降，甚至无法分析。 几种脱气方法比较： 1、?氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好但成本高。 2、加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。 3、抽真空脱气法：易抽走有机相。 4、?超声脱气法：一种较为常见的脱气法。流动相放在超声波容器中，用超声波震荡10～15分钟，此法效果并不太好但操作简单。 如果管路中使用peek树脂部件，请不要使用下列流动相： 浓硫酸、浓硝酸、二氯乙酸、丙酮、四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿和二甲基亚砜 特别注意HPLC使用过后的系统清洗： 含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法： 1、?先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3～5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。 此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗。 2、?再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30～60分钟后停泵。此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。 3、?最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。 如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。 液相色谱系统的日常维护及注意事项（之三） 流动相的更换 在分析过程中，有时需要更换流动相进行分析。一定要注意前一种使用的流动相和所更换的流动相是不是能够相溶。如果前一种使用的流动相和所更换的流动相不能够相溶，那您就要特别注意了。要采用一种与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相进行过滤、清洗。 较为常用的过滤流动相为异丙醇，但实际操作中要看具体情况而定，原则就是采用与这二种需更换的流动相都能相溶的流动相。一般清洗时间为30～40分钟，直至系统完全稳定。 如不进行以上“特别注意”上述步骤的操作，将会导致系统管路阻塞。严重时将引起流通池污染堵塞，不得不更换流通池。用户就要承担不必要的损失了。 储液器的注意事项： 保持流动相储液器的清洁是保证仪器正常使用的关键。要使用HPLC级的溶剂，对试剂含有缓冲盐及非HPLC级的流动相一定要用0.45μm过滤器除去其中的微量物质。 液相色谱系统的日常维护及注意事项（之四） 管路连接的注意事项 1、?将管子完全插入开口端，直至其与开口端的末端相碰为止。否则将产生死体积，引起峰展宽。 2、?为了使柱外效应减到最小，获得理想的分析结果，尽量使用管径细的管路作为连接。 3、?管路接头不要拧得过紧，以防破坏螺纹。 液相色谱系统的日常维护及注意事项（之五） 基本操作注意事项 泵运行前先打开排空阀，用注射器抽出流动相，观察10秒，流动相应连续流出。不用排空阀时应将其关闭，否则大气压力会使流动相从排空阀出口流出。 在使用仪器过程中，注意贮液瓶里的流动相是否够用，如快用尽应及时更换。更换流动相时务必停泵，防止吸入大量空气，影响仪器正常运作。 在启动分析进样时，请快速扳动7725i进样阀，否则会引起系统压力突跳，影响仪器的使用寿命。 如对样品分析的定性定量要求较高，应配置柱温箱，保持温度恒定。 若流动相不是纯甲醇，样品分析