宫颈病变中HP亚型感染特点及意义.docVIP

宫颈病变中HPV亚型的感染特点及意义 陶琨 杨静 左绪磊 杨华 郭振华 陈向宇 孟晓彦 王春蕾 唐龙英 [摘要] 目的 探讨宫颈病变中HPV亚型的感染特点及意义。方法 收集277例阴道镜活检病例行HPV基因型测定；相应的宫颈细胞行HPV杂交捕获定量（HCII）检测。结果 随着宫颈病变程度加重，HPV一重感染逐步上升，多重感染逐步下降，CIN I组与CINIII组、鳞癌组比较差异有显著性（P?0.05）；HPV亚型感染频度前六位依次为16、58、33、52、31、18； HPV分型与HCII均显示随着宫颈病变程度的加重，HPV感染率上升，但两种方法检测结果差异无显著性（P0.05）。结论 HPV亚型检测可以用于高危人群的宫颈病变筛查，达到早发现、早治疗的目的，并且明确HPV亚型的分布特点将有助于HPV疫苗的开发应用。 宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤，宫颈上皮内瘤变可以进一步发展成宫颈癌。大量研究表明HPV感染是宫颈癌和上皮内瘤变发生的必要因素[1]，依据HPV与肿瘤的关系，不同类型的HPV感染可以导致不同的临床病变。HPV高危型可以引起宫颈癌，而低危型只引起良性病变[2]。本文通过检测277例宫颈阴道镜活检组织中HPV的基因型，旨在探讨不同宫颈病变中HPV亚型的感染特点及其意义，并且比较了HPV分型法与HPV杂交捕获定量法（HC II）在判定HPV阳性中效能。 材料与方法 材料 277例宫颈病变患者（上海市长宁区中心医院收治），年龄18-76岁。诊断标准参照2003年WHO《女性生殖器官和乳腺肿瘤的病理学和遗传学》。宫颈活检示慢性炎30例（正常组），CIN I级70例（CIN I组），CIN II级67例（CIN II组），CIN III级98例（CIN III组），宫颈鳞癌12例（宫颈鳞癌组）。 宫颈细胞取材方法：先擦去宫颈表面黏液，将宫颈细胞刷插入距宫颈管内1cm处，顺时针旋转5 圈左右，置入细胞保存液中。 HPV基因型测定 将石蜡组织块切成4μm厚的切片，除去周边多余石蜡。取4片石蜡切片，置于1.5 ml离心管管底，加入裂解液100μl，用吸头捣碎切片，封盖、混匀。在100℃水浴10min后立即13000rpm离心5min，取中层DNA溶液作为扩增模板。HPV基因芯片试剂盒购自深圳亚能公司，同时检测23型HPV基因型，低危型5种包括HPV6、11、42、43、44；高危型包括HPV16、18、31、33等18 种基因型，PC为质控点，显色阳性为实验结果可靠。以最常用的HPV通用引物进行PCR扩增。PCR参数50℃UNG酶消化15 min，95℃预变性10 min，94℃变性30 s，42℃复性90 s，72℃延伸30 s，扩增40个循环之后72℃延伸5 min，PCR产物4℃保存。取PCR产物5μl加入6 ml杂交液(2 ×SSC, 0. 1% SDS, pH7. 4)混匀，加热后放入基因芯片于51℃杂交1 h。取膜、洗脱、浸泡、避光显色，观察结果。杂交膜条上显示蓝色斑点者为阳性，多个斑点者为多重感染。 HPV检测 采用美国Digene公司提供的HCⅡ试剂盒，抽提宫颈细胞DNA经扩增后检测13种HR2HPV亚型 ( 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59 和68) 。此法不能对单一HPV分型，任一种高危型HPVDNA 超过确定阈值时，检测结果均为阳性。阳性诊断阈值RLU/ CO=1.0。 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件，RXC组双向无序x2检验对数值进行统计学分析，P 0.05为差异有显著性。 结果 各组HPV感染情况 277例宫颈病变中HPV感染率为88.1%（244/277），其中一重感染率为72.1%（176/244），多重感染率为27.9%（68/244）。一重感染中随病变加重，感染率递增，CIN I组与CINIII组、鳞癌组比较差异有显著性（P?0.05）；多重感染中以二重感染最多，占85.3%（58/68），其次是三重感染为11.8%（8/68），最少见的是四重感染仅占2.9%（2/68）。（表1） 表1各组HPV感染情况 组别 阳性n 一重 二重 三重 四重 正常 8例 7（87.5%） 0 1（12.5%） 0 CIN I 60例 37（61.7%） 17（28.3%） 4（6.7%） 2（3.3%） CIN II 66例 48（72.7%） 16（24.3%） 2（3.0%） 0 CIN III 98例 74（75.5%） 23（23.5%） 1（1.0%） 0 鳞癌 12例 10（83.3%） 2（16.7%） 0 0 2.2HPV亚型的分布情况 244例HPV阳性的病例中，检测到的HPV高危型有14种，