血管紧张素ⅠSOP.docVIP

【原理】 血浆肾素活性的测定，实际上是测定血浆中血管紧张素Ⅰ的产生速率。即同一样品（血浆）取双份，一份让其直接与抗体反应，测其AⅠ的浓度，称为对照管；另一份则在37℃温浴一段时间后，再让其与抗体反应，测其AⅠ浓度称作测定管。测定管的AⅠ浓度减去对照管的AⅠ被温浴时间除之，则为单位时间内AⅠ的产生速率，称之为肾素活性。 【试剂】 生产商：北京北方生物技术研究所。 组份 100管 50管 制品状态 1) AⅠ标准品(S0～S6) 6瓶 6瓶 冻干品 2）125I- AⅠ（红色） 2瓶 1瓶 冻干品 3）兔抗- AⅠ抗体（兰色） 1瓶 1瓶 冻干品或液体 4）驴抗兔免疫分离剂 1瓶/50ML 1瓶/25ML 液 体 5）AⅠ、AⅡ缓冲液 1瓶/40ML 1瓶/40ML 液 体 6）EDTA抗凝剂 1瓶/3ML 1瓶/3ML 液 体 7）二巯基丙醇 1瓶/1.5ML 1瓶/1.5ML 液 体 8）8-羟基喹啉硫酸盐 1瓶/3ML 1瓶/3ML 液 体 9）AⅠ、AⅡ质控 2瓶 2瓶 冻干品 10）AⅠ调节剂 1瓶/1.5ML 1瓶/1.5ML 液 体 注：7）、8）、9）三种试剂与AⅡ药盒共用。兔抗- AⅠ抗体为液体时请直接使用（10ml/100管,5ml/50管）。 【仪器】 1，γ-计数器 2，低温离心机 3，37℃水浴箱 【样本要求】 1， 酶抑制剂抗凝管的准备： 按取血5ml计，每支取血管中加 50ul 0.30EDTA （如有晶体析出，可温热溶解后使用） 25ul 0.32M二巯基丙醇 50ul 0.34M 8-羟基喹啉硫酸盐 注：（1）酶抑制剂抗凝管最好使用带塞或盖的管子，配好后2～8℃密封贮存可用一周，若用敞口管则最好现用现配。 （2）取血量增加或减少时，请按比例增减各试剂。例如：取血2ml时，三种试剂加入 量份分别为20、10、20ul 。 2，采血 肘静脉取血5ml，拔出针头后注入到酶抑制剂抗凝管中（采血管应有盖或塞），将管口封好后上下颠倒数次，混匀后即刻放入冰水浴中或4℃冰箱中1～2小时，取出后2500转/分，离心7分钟（最好在4℃离心），分离血浆。将血浆密封后放入冰箱保存（-15℃以下），可用2个月。 β-阻断剂、血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平、一般要在停药后三周测定。不适停药的病人改服胍乙啶等影响PRA较小的降压药。 钠摄入量影响PRA水平，故病人测定PRA三天前应适当减少食盐摄入量。病人应测定取血前24小时尿钠含量，以供分析PRA结果时参考。 激发试验：病人清晨不起床或空腹平卧两小时，可在6:00～8:00之间抽取基础态血标本，然后肌肉注射速尿0.7mg/kg体重，总剂量不大于50mg，保持立位两小时（可以走动），即坐取激发态血标本。 注：注射速尿后两小时内随尿排出的水和电解质的量较多，如病人血钾过低，试血前应适当给予补充。试验过程中病人可能出现口渴、无力、出汗等，一般不重。如过重，应酌情终止试验，让病人平卧，并给予糖盐茶水。 【操作】 1: 用聚苯乙烯试管编写反应试管：T、NSB管、标准管（S0→S6），质控管（C1、C2）和病人样品试管1→N管（病人样品试管分为“对照管”和“测量管”）。 2: 先将调节剂加入所要测量的各试验管10ul，再将病人血清100ul分别加入“对照管”和“测量管”。 3：将样品“测量管”放入37℃水浴箱中1小时（准确记录时间），样品“对照管”置于4℃冰箱中或者冰水浴中1小时。 4：AⅠ、AⅡ缓冲液200ul加入NSB管；AⅠ标准品(S0～S5)依次加入已编写好的各试验管100ul；再将质控试剂加入编写好的质控管100ul。 5：将125I- AⅠ（红色）试剂依次加入各管100ul，兔抗- AⅡ抗体（兰色）加入除T管、NSB管外的各反应试管100ul。摇匀后放置2～8℃冰箱过夜（16～24小时）。 6: 分离剂充分摇匀后加入各代测试管500ul（T管除外）室温放置30分钟， 3500RPM低温离心15分钟，吸弃上请液，测各沉淀管的放射性计数（cpm）。 7:计数。在电脑桌面打开“r i a”文件，进入RIA6.0软件的主菜单，选择主菜单“在线处理”在“选择测量项目”