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R446.5 单位代码：10660 学 号：05005001003 成都医学院 05级医学检验系本科毕业生论文 大蒜对耐药菌株体外抗菌活性的初探 学 生： 李学会 导 师： 于敏 朱树珍 年 级： 2005级 专 业： 医学检验 2010年 4 月 5 日 目 录 摘 要…………………………………………………… 3 前 言…………………………………………………… 3 材料与方法……………………………………………… 3 结 果…………………………………………………… 4 讨 论…………………………………………………… 5 参考文献………………………………………………… 6 致 谢…………………………………………………… 6 英文摘要………………………………………………… 7 论文原创性声明………………………………………… 7 附：综 述……………………………………………… 7 大蒜对耐药细菌体外抗菌活性的探讨 专业名称：医学检验系 学生姓名：李学会 指导老师： 于敏 摘要 目的 探讨紫皮大蒜对临床多重耐药菌株体外抑菌活性。方法 用纸片扩散法和稀释法检测紫皮大蒜对临床多重耐药菌株抑菌活性进行观察。结果 紫皮大蒜对受试菌均有不同程度的抑制和杀灭作用，对金黄色葡萄球菌和鲍曼不动杆菌的抑菌活性最强，对铜绿假单胞菌的抑制作用最弱。 关键词 大蒜 体外抑菌活性 临床多重耐药株 1.前言：随着抗菌药物的广泛使用，细菌出现耐药和多重耐药的问题日趋严重。造成临床治疗细菌感染的有效药物种类减少，甚至困难[1]。寻找能抑制耐药菌的物质突显其重要性和迫切性。大蒜原名葫、葫蒜，是百合科葱属多年生草本植物，具有广谱类抑菌作用[2]。研究发现，大蒜对几十种细菌有较强的抑制和杀灭作用[3]。大蒜对临床耐药菌株是否有抑制作用的研究尚不多见，本次实验就大蒜对临床耐药菌株体外抗菌活性进行初步探索，旨在对耐药株引起的感染探索新的治疗思路提供实验依据。 2. 材料与方法 2.1 材料 菌种：标准株 金黄色葡萄球菌（25923），大肠埃细菌（25922），铜绿假单胞菌 （27853），（成都医学院检验系临床微生物学教研室提供）；耐药株 金黄色葡萄球菌，大肠埃细菌，铜绿假单胞菌，鲍曼不动杆菌，肺炎克雷伯杆菌，产气肠杆菌，阴沟肠杆菌，（贵阳医学院附属医院细菌培养室提供上述耐药菌主要为耐青霉素和氨基糖苷类抗生素的细菌）。 培养基：营养琼脂 (蛋白胨1.50%，肉浸膏0.5% 氯化钠0.5% 琼脂粉1.7%)　 营养肉汤（蛋白胨1.5%，肉浸膏0.5% 氯化钠0.5%） 2.2 蒜汁的提取与菌液的配制 蒜汁：选用无烂，无芽，色泽鲜明的市售紫皮大蒜用无菌研钵捣碎后吸取蒜汁备用 菌液：将受试菌转血平板放37℃培12~18h后，用生理盐水调成0.5麦氏单位（1.5亿/ml）的菌液备用。 2.3 纸片扩散法测定抑菌环 用无菌棉拭子蘸取已制备好的菌液，并在管内壁轻轻将多余菌液挤去后，均匀涂布接种于营养琼脂平板表面，置室温下干燥3~5min后，再用大蒜汁浸泡直径6mm纸片（0.0067/ml）紧贴于表面，各纸片中心相距大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm；平板置 37 ℃温箱孵育16~18h后测量结果。 2.4 试管稀释法测定大蒜汁对耐药菌的抑菌浓度和杀菌浓度 用营养肉汤稀释好的终浓度为1：4蒜液4ml作为第一管，从第一管取2ml加入第二管，依次作对倍稀释，自第10管吸出2ml弃去，第11管为对照。每个浓度均重复作3次。将配制成0.5麦氏单位的菌液按不同菌种分类，将同一种细菌按每株吸取0.1ml混合后用无菌盐水稀释15倍，将稀释后的菌液在上述各管中每管加入0.1ml，混匀后放37℃培养12~18h，观察结果，无混浊的各管中蒜汁稀释度最高的那管所对应的大蒜汁浓度即为抑菌浓度， 将无混浊的各测试管混匀后取10μl于琼脂平板37℃孵育过夜，观察结果，能杀死接种细菌的99.9%蒜汁的最低浓度即为杀菌浓度。 2.5 不同时间大蒜对金黄色葡萄球菌的抑制作用的测定 用营养肉汤稀释蒜液到1：128后取1ml与稀释到6×104/ml的金黄色葡萄球菌标准株的菌液0.05ml混匀，分别于0小时、0.5小时，1小时、2小时、4小时，6小时，24小时，48小时，后取5ul于营养琼脂平板37℃孵育过夜，菌落计数。 3 结果 3.1纸片扩散法测定抑菌环的结果 大蒜对受试菌均有不同程度的抑制作用，但受试菌种之间有高低之分， 大蒜对金黄色葡萄球菌的抑菌活