S008红细胞ABO血型(正定型)、RhD鉴定标准化操作规程解析.docVIP

文件名 红细胞ABO血型（正定型）、RhD鉴定标准化操作规程 编制人 审核人 批准人 批准日期 修改日期 签 字 修改日期 签 字 复审日期 签 字 复审日期 签 字 红细胞ABO血型（正定型）、RhD鉴定标准化操作规程 一、目的 为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型（正定型）与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。 二、方法 采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正定型）与RhD血型。 三、原理 将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，检测卡从左向右顺序第一支至第三支和第四支至第六支微柱凝集检测管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM试剂。微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。 四、适用范围 适用于输血前患者红细胞ABO血型（正定型）确认与RhD血型复查。出 五、仪器设备 普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器； 六、试剂 1、试剂名称：ABO、RhD血型检测卡（微柱凝胶）； 2、试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司； 3、批准文号：国药准字 4、包装规格：聚丙烯卡12卡×2检测人份/盒； 5、贮藏条件；18-25℃避光保存。 6、有效期：自检定合格之日起12个月； 7、试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；抗D效价≥64；特异性试验合格。 七、检测样本要求 1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。 2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。 3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。 4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。 八、操作步骤 1、红细胞稀释悬液的制备：采用塑料试管将采集的标本配制成0.5～0.8%红细胞生理盐水悬液（10ul压积红细胞加入1.2ml生理盐水中）。 2、将微柱凝胶试剂卡标号； 3、将待检者红细胞稀释悬液分别加入第一至第三管或第四至第六管中，每管50ul； 4、即刻使用血型血清学多用离心机离心5分钟，2分钟900rpm，3分钟1500rpm，取出肉眼判定结果。 5、结果判定：见表1。 （1）阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。 反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部颗粒愈小，反应愈弱。 （2）阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的底部。 （3）对于红细胞RhD血型阴性的样本，应进一步作红细胞RhD阴性确认试验。 表1 微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO、RhD血型结果鉴定 血型 抗A 抗B 抗D 抗A 抗B 抗D D 阳 性 A + - + + - + B - + + - + + O - - + - - + AB + + + + + + D 阴 性 A + - - + - - B - + - - + - O - - - - - - AB + + - + + - 九、质量控制 1、对新进批号的试剂应作抗体效价验定。 2、此检测项目应参加卫生部临床检验中心组织的室间质评，且成绩合格； 3、每次做血型鉴定应采用标准红细胞做室内质量控制，且要求在控。 4、严格执行查对制度，判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误等引起的差错。 5、检测标本应在2～8℃保存留一周，以备复查。 十、生物参考区间 ABO血型：A型，B型，O型，AB型； RhD血型：阳性，阴性。 十一、干扰因素 1、冷凝集素：在恶性肿瘤或病原体感染后有时冷反应性自身抗体可异常增高造成溶血。 2、自身抗体：红细胞被自身抗体强烈致敏后将干扰ABO定型，且自身抗体的存在会导致交叉配血不合。 3、弱凝集：当患者红细胞上抗原异常可能会导致减弱的或缺少的凝集反应，如亚型红细胞抗原性较弱、新生儿、老年人及少数恶病质患者红细胞抗原形成不足或敏感性降低。 4、细菌性凝集：常见有类B凝集，A型或O型病人因大肠杆菌O86感染，