DNA大提方法-改进.docVIP

Isolation of genomic DNA from bacteria 细菌基因组DNA的提取1. 将培养好的600 ml菌液离心收集在50 ml 离心管中，用灭菌悬洗菌体、离心，共3次。. 加入10 ml TE 悬浮，加入溶菌酶至终浓度2 mg/ml，37 ℃水浴 2h以上。μg/ml，55 ℃水浴 2h。（水浴后菌液清澈效果最好） 4. 加入等体积（10 ml）的Tris 饱和酚（pH 8.0），轻轻上下颠倒摇动 min，再加入等体积（10 ml）的氯仿异戊醇混合液（24∶1，v/v），轻轻上下颠倒摇动 min，1000 rpm离心10 min用大口吸头吸取上清到干净的离心管中μg/ml, 蛋白酶K至终浓度 100 μg/ml，55℃水浴2h。 6. 加入等体积的氯仿异戊醇混合液（24∶1，v/v），轻轻上下颠倒摇动 min，1000 rpm离心10 min用大口吸头吸取上清到干净的离心管中加入2倍体积冰冻无水乙醇，用干净的玻璃棒沿一个方向，用冰冻70%乙醇浸洗风干。 8. 将带有DNA丝的玻璃棒置于ml 无菌0.1×SSC中, 4 ℃存放至DNA完全溶解℃冻存μl RNA酶配制成 5mg/ml，每次加入100 μl 蛋白酶K配制成 20 mg/ml，每次加入 50 μl