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凝胶层析柱特性分析 （实验报告） 实验日期：2015年4月21日 实验温度：室温 实验地点：生物化学与遗传学实验室 指导老师：****** 班级：2013级生物技术1班 姓名：***** 学号：****** I. 实验目的 1.掌握凝胶层析柱的基本原理； 2.学习凝胶层析柱的操作技术； 3.了解凝胶层析柱的应用。 II. 实验原理 凝胶层析是利用有一定孔径范围的多孔凝胶，对混合物中各组分按分子大小进行分离的层析技术。把含有不同大小分子的混合液，铺加在胶面上，让它流过凝胶柱。由于凝胶具有网络结构，当混合液通过凝胶颗粒缝隙中时，溶液中的溶质凡是比网孔小的分子，都能自由进入颗粒内部，而比网孔大的分子则不能进入。因此，在洗脱过程中，大分子物质必然先于小分子物质向下移行，先流出的是大分子物质，小分子物质后流出，从而达到分离的目的。 在凝胶层析中，凝胶粒子间隙的外水相当于移动相，粒子内水相当于固定相。当溶质随洗脱液自上向下移动时，溶质在内水之间连续不断达成分配平衡。相对分子质量大的因不易渗入凝胶孔内，分配系数较小，用较少的洗脱液就能从柱中洗脱出来；反之，相对分子质量小的因渗入凝胶孔内，分配系数较大，需较多的洗脱液才能从柱中洗脱出来。 为了精确地衡量混合物中某一被分离成分在一定的凝胶柱内的洗脱行为，常采用分配系数Kd来衡量，Kd的定义