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分光光度法 南方医科大学 生物化学与分子生物学实验教学中心 内容 分光光度法 概念：是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。 特点：灵敏度高、精确度高、操作简便、快速。对于复杂的组分系统，无须分离即可检测出其中所含的微量组分的特点。 分光光度法分类 紫外分光光度法（200～400nm） 可见分光光度法（400～760nm） 红外分光光度法（760～10000nm） 分光光度法的原理-1 Lambert-Beer定律 分光光度法的原理-2 分光光度法的原理-3 分光光度法的原理-4 分光光度法的原理-5 如何求被测组分的含量 1.利用标准管计算测定物的含量 2.利用标准曲线计算测定物含量 3.利用标准系数法求出待测溶液的浓度 4.利用消光系数法求出待测溶液的浓度 利用标准管计算测定物的含量 在相同条件下测定同种已知浓度（CS）标准液的吸光度（AS），同时也测定末知浓度（CU）的吸光度（AU）， 利用标准曲线计算测定物含量 先配制一系列浓度由小到大的标准溶液，分别测出它们的吸光度。然后以各管吸光度（A）为纵坐标，各管的浓度（C）为横坐标，在方格坐标纸上作图。 若被测物质对光的吸收符合光的吸收定律，则必然得到一条通过原点的直线，即标准曲线，亦称工作曲线。以后对末知浓度物质测定时，无需再作标准管，据测定管吸光度从标准曲线上即可求得测定物