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植物衰老生理1 植物组织中 可溶性蛋白的测定 衰老时的生理生化变化 蛋白质显著下降,核酸含量的变化,光合速率下降,呼吸速率下降, 生物膜结构变化, 植物内源激素的变化 等。 植物叶片衰老过程中，叶绿素含量下降，叶色变黄，蛋白质含量减少（可溶性蛋白）。 自由基代谢失调, 并在体内积累膜脂过氧化的产物之一：MDA 可溶性蛋白测定的原理 考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，溶液的吸收光谱发生变化，从465nm偏转到595nm，并表现出在595nm处的吸收值与溶液中的蛋白质含量有线性关系，其范围从0~1000?g/ml。据此可制作蛋白质的标准曲线，牛血清蛋白为常用的标准蛋白。 待测样品经缓冲液提取后，可溶性蛋白溶于上清液中，蛋白质提取液与考马斯亮蓝G-250反应呈蓝色。测定595nm吸收值，并根据蛋白质的标准曲线，得到样品中可溶性蛋白的含量。 实验步骤 制备蛋白提取液 称叶龄差异明显的叶片各0.50g ，加入5ml 磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8），于冰浴中研磨提取，匀浆液以8000g 离心力作用下（4?C）离心10min，其上清液即为蛋白提取液。 注意： 2人1组 离心前平衡 蛋白标准曲线的制作 蛋白质标准溶液的配制：称取牛血清蛋白（电泳纯）溶于0.15M NaCl溶液中，制成1mg/ml的母液，再用磷酸缓冲液配成各含0、40、80、120、160μg /200ul牛血清蛋