7免疫学应用.docVIP

第一部分 导入语 我们前面学习的都是些最基本的免疫学知识，免疫学作为一门年轻的学科，发展可以说是日新月异。随着免疫学理论和技术的快速发展，免疫学的应用范围也从经典的传染病的预防、诊断和治疗，扩大到其他疾病，如超敏反应疾病、肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺陷病和器官移植后的排斥反应等方面的预防、诊断和治疗，以及作为有关学科科学研究的手段。 第二部分：教学内容 第9章 免疫学应用 第一节 免疫诊断 人体感染病原微生物后，体内可以产生特异性的免疫或细胞免疫反应。这些免疫反应我们可以用一定的试验方法进行体内或体外的检测，称为免疫诊断。免疫学诊断技术及检测技术具有高度特异、灵敏度高、简便、快速等优点，现在已广泛訬在各个分支学科中。 一、抗原或抗体的检测 体液免疫测定法的原理是根据抗原与其相应的抗体在体外有电解质存在的情况下可发生特异性结合，作用后，会出现肉眼可见的反应现象。因此既可用人工制备的已知抗原去检测体内是否存在相应的未知抗体，也可用已知的抗体去检测未知的抗原。抗原抗体的体外检测既可用于传染病的病原学诊断和其他疾病的诊断，也可用于微生物及其成分的检测、鉴定和分型。 因为抗体主要存在于血清中，做试验时一般采用血清，所以又称为血清学反应。 目前常用的抗原抗体反应有三种类型：凝集反应，沉淀反应和免疫标记技术。 （二）抗原或抗体的检测方法： 凝集反应 将颗粒型或细胞性抗原（如细菌、红细胞）与相应抗体混合，在电解质存在下形成肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。此反应中抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。 (1)直接凝集反应：包括玻片法和试管法 (2)间接凝集反应：为了提高反应的敏感性，可将可溶性抗原或抗体先吸附于一种与免疫无关的颗粒状物体（称载体颗粒）的表面，然后与相应抗体或抗原作用，在电解质存在下就会发生凝集现象，此反应称为间接凝集反应。 (3)间接凝集抑制反应：将可溶性抗原或相应抗体预先混合作用后，再加入抗原载体，由于抗体已被可溶性抗原结合，阻断了抗体与载体上的抗原作用，不再出现凝集现象，称为间接凝集抑制试验。如常用的免疫妊娠试验就属此类。（HCG，人绒毛膜促性腺激素） 沉淀反应 将可溶性抗原（细菌滤液、血清等）与相应抗体混合，在电解质存在下形成可见的沉淀物，称为沉淀反应。沉淀反应中的抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。 (1)环状沉淀法 (2)双向扩散琼脂法 (3)单向琼脂扩散试验 (4)对流免疫电泳试验 (5)火箭电泳 补体结合反应 本反应有两个系统五种反应成分。一是被检系统，即已知的抗体和待检的未知抗原（或已知抗原与待检的未知抗体）。另一为指示系统，包括绵羊红细胞和溶血素，还有就是参与反应的补体（新鲜豚鼠血清） 中和试验 是指抗体使相应的毒素毒性消失的试验。中和试验常用于毒素的鉴定。中和试验也包括病毒的中和试验，病毒的中和试验常用于病毒的鉴定及病毒所致疾病的诊断。 免疫标记测定技术 本技术是指用酶、荧光素、放射性同位素、发光剂等标记抗体或抗原后进行的抗原抗体反应。这些技术具有高度特异、灵敏、快速、能够定量测定甚至定位测定，又易于观察结果等很多优点，所以现在应用广泛。 (1) 酶免疫测定（ELA）：是用酶标记的抗体或酶标记的抗抗体进行的抗原抗体反应。在ELA中常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶。当加入底物后，在酶的催化下生成有色物质，可以用目测或仪器检测，灵敏度很高。 （2）酶联免疫吸附试验（ELISA）是根据酶免疫测定原理而发展的，常用的方法有间接法、双抗体夹心法和抗原竞争法，被广泛用于抗原抗体的测定。 （3）免疫荧光技术 该法的原理基本与酶法相同，只是用荧光素（异硫氰酸荧光素、罗丹明B）代替酶来标记抗体。荧光可以在荧光显微镜下观察，能定性、定量和定位测定。常用的有直接法和间接法。 二、淋巴细胞的功能检测 细胞免疫测定法有体外法和体内法两种： （一）体外法 细胞免疫体外测定方法很多，最常用的方法有：淋巴细胞转化试验、E－玫瑰花环形成试验、移动抑制试验、细胞毒性试验、巨噬细胞吞噬功能试验、T细胞各亚类数量和比例、各类细胞因子活性测定等 1.T 细胞功能测定 (1) 淋巴细胞转化试验 : 又称 T 细胞增殖试验。植物血凝素 (PHA) 、刀豆蛋白 A(Con A) 等丝裂原能非特异地激活培养的 T 细胞，使其转化为淋巴母细胞。在增殖过程中，细胞 DNA 、 RNA 、蛋白质合成增加，细胞形态改变，最终细胞分裂。常用的检测方法有 3 H-TdR 掺入法和 MTT 法。此处仅介绍 3 H-TdR 掺入法：在外周血单个核细胞 (PBMC) 中，加入 PHA 共同培养，终止培养前 8 ～ 15h ，加入氚标记的胸腺嘧啶核苷 ( 3 H-TdR) ，由于 3 H-TdR 能掺入细胞合成的 DNA 中，细胞增殖水平越高，掺入的放射性核素就越多。培养结束后收