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融合抑制剂 HIV感染过程：包括吸附，进入，脱壳，逆转录，整合，复制，转录，翻译，装配，成熟等各个阶段。 融合过程：首先, HIV-1包膜糖蛋白表面亚基gp120与靶细胞膜的CD4受体结合, 附着在细胞上; 接着, gp120再与靶细胞的辅助受体 (CCR5或CXCR4) 结合; 最后跨膜亚基gp41的构象发生改变，其N端的融合肽插入到宿主细胞膜内, 启动病毒包膜与靶细胞膜的融合, 完成病毒进入宿主细胞的过程。 Gp41介导膜融合过程： Gp41由融合肽 、胞外区、跨膜区等构成。在其胞外区内存在两个与膜融合密切相关的螺旋结构功能区,即N末端重复序列 (HR1)和C末端重复序列(HR2)。膜融合过程中, HR2与HR1相互作用, 形成一种六螺旋体核心结构,使得两种膜相互接近, 最终发生融合。 为什么艾滋病不可治愈？？？ 1.艾滋病病毒进入人体后，会攻击一类免疫细胞T细胞，导致它们遭到完全破坏，免疫系统出现了问题，自然就难以清除病毒了。2.如果艾滋病病毒进入潜伏期，病毒潜伏在免疫细胞中， HIV前病毒整合入宿主细胞基因组中，不发生复制作用，免疫会把HIV忽略不被免疫系统识别，自身免疫无法清除。这也可能导致药物对其无效。 而艾滋病病毒可以通过被感染的供体细胞作为媒介在细胞间传播。一旦发现未受感染的靶细胞，供体细胞便将病毒传染给该细胞。 鸡尾酒疗法 原指“高效抗逆转录病毒治疗”（HAART），由美籍华裔科学家何大一于1996年提出，是通过三种或三种以上的抗病毒药物联合使用来治疗艾滋病。该疗法的应用可以减少单一用药产生的抗药性，最大限度地抑制病毒的复制，使被破坏的机体免疫功能部分甚至全部恢复，从而延缓病程进展，延长患者生命，提高生活质量。 鸡尾酒治疗方案 1.基于蛋白酶抑制剂的鸡尾酒 疗法：1个蛋白酶抑制剂联合2个核苷类逆转录酶抑制剂。  2.基于非核苷类逆转录酶抑制剂的鸡尾酒疗法：1个非核苷类逆转录酶抑制剂， 联合2个核苷类逆转录酶抑制剂。  3.三个核苷类逆转录酶抑制剂的鸡 尾酒疗法  局限性 鸡尾酒的局限性主要表现在：对早期艾滋病病人相当有效，但对中晚期患者的帮助不大，因为这些病人的免疫系统已被艾滋病毒不可逆性地破坏了；此外此疗法的花费也甚高，并非一般人所能承受 Thank you * 7版教材图21-3，485页 生化pbl HIV感染的实验室诊断技术 1、HIV核酸检测 2、 HIV抗体检测 3、HIV抗原检测 HIV核酸的检测 随着生物技术的发展,核酸检测得到了人们越来越多的重视,它可直接检查HIV RNA,可在发现血清学变化之前检测HIV感染。简单的说就是病毒感染人体后，一般情况下可通过一系列检测被发现，而最早能被检测到的是病毒核酸。现有的酶联免疫等血清学检测方法检测的是抗原或抗体，而核酸检测技术检测的是病毒核酸，所以能更早地发现病毒感染。 HIV核酸的定性检测 核酸分子杂交（nucleotide molecular hybridization） 以DNA的变性、复性为理论基础 指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA），在一定条件下按碱基互补配对原则经过复性处理后，形成异源双链的过程 方法 原位杂交、RNA印迹(Nothern 印迹)、DNA印迹(Southern 印迹）、多聚酶链反应(PCR)、逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)等，以PCR和RT-PCR最为常用。 Southern 印迹可用于分析基因拷贝数的变化 电泳 转移 杂交，显影 酶切DNA样品上样 DNA印迹 重物 Northern 印迹和RT-PCR可用于分析基因转录水平的变化 Northern blot是将RNA从凝胶中转印到硝酸纤维素膜上，定性分析mRNA的常用方法； RT-PCR是以mRNA为模板反转录合成cDNA、再以cDNA为模板进行特异性扩增，进行RNA定性或定量分析的一种方法； 二者均可用于分析基因转录水平的变化 。 HIV核酸的定量检测 1.RT-PCR 2核酸序列扩增实验(NASBA) 3.分枝DNA信号扩大系统(bDNA) 4荧光实时PCR * 聚合酶链式反应（PCR） 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR） 是一种在体外特异地扩增已知基因的方法； 可用于分析基因及其产物的水平变化； 可进行实时、定量分析； 可结合免疫沉淀的方法确定蛋白质与DNA序列的相互作用。 * PCR技术的工作原理 5` 3` 3` 5` 5` 3` 3` 5` + + 5` 5` 变性、退火 引物 5` 3` 3` 5` + 5` 5` dNTPs Taq