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1.(2015湖北黄冈一模)电影中,“蜘蛛侠”能产生高强度的蜘蛛丝,现实中的基因工程也创造出了“蜘蛛羊”,该羊的乳汁中含有蛛丝蛋白,高强度的蛛丝蛋白可用于许多重要的特种工业领域。请回答:
(1)为保证实验成功,产生蛛丝蛋白的基因最好从 (填“基因组”或“cDNA”)文库中获取。若要获得大量的目的基因片段,可采用PCR技术进行扩增,扩增过程需使用 酶。?
(2)在构建含蛛丝蛋白基因表达载体时,需使用的工具酶有限制酶和DNA连接酶,目的基因应与启动子等调控组件组合在一起,启动子是 识别和结合的位点;构建完成的基因表达载体需通过显微注射技术导入羊的 ,获得重组细胞。?
(3)若所得到的“蜘蛛羊”乳汁中没有检测到蛛丝蛋白,应先采用 技术检测“蜘蛛羊”乳腺细胞中是否含有 ;若已确认此步成功,则应该继续检测是否 。?
解析:(1)蛛丝蛋白基因是真核基因,为保证实验成功,目的基因最好从cDNA文库中获取。PCR技术进行扩增目的基因时需使用热稳定DNA聚合酶。
(2)启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点;构建完成的基因表达载体需通过显微注射技术导入羊的受精卵,获得重组细胞。
(3)若所得到的“蜘蛛羊”乳汁中没有检测到蛛丝蛋白,应先采用DNA分子杂交技术检测“蜘蛛羊”乳腺细胞中是否含有目的基因;若已确认此步成功,则应该继续检测是否转录出了蛛丝蛋白的mRNA。
答案:(1)cDNA 热稳定DNA聚合(Taq)
(2)RNA聚合酶 受精卵
(3)DNA分子杂交 蛛丝蛋白基因(目的基因) 转录出了蛛丝蛋白
的mRNA
2.(2015陕西宝鸡九校一联)“金色大米”由于含有可以生成维生素A的β胡萝卜素。它呈现金黄色泽,故称“金色大米”。“金色大米”的培育流程如图所示。请回答下列问题。(已知酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—。酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—)。
(1)培育“金色大米”的基因工程操作中,d过程最常用的方法是 ;图中c的构成除了复制原点、目的基因、标记基因外,还必须有 、 等。?
(2)据图分析,在构建c的过程中,目的基因用 (填“限制酶Ⅰ”或“限制酶Ⅱ”)进行了切割。该酶切割后形成的黏性末端写作 。?
(3)过程e运用了细胞工程中的 技术;在目的基因的制备过程中,之所以要进行a、b过程,而不在a过程的模板DNA上直接切取目的基因,是因为 。?
解析:(1)分析题图,d过程为将目的基因导入水稻细胞,目的基因导入水稻细胞时,最常用的方法是农杆菌转化法;图中c为基因表达载体,含有启动子、终止子、目的基因、标记基因和复制原点等。
(2)根据题意,酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—,因此限制酶Ⅰ识别的序列都能被限制酶Ⅱ识别并切割,露出相同的黏性末端,分析题图,目的基因左右两侧分别为限制酶Ⅰ和限制酶Ⅱ的识别和切割位点,因此用限制酶Ⅱ可以把目的基因切割,并露出相同的黏性末端,末端为GATC—或—CTAG。
(3)过程e为把水稻细胞培育成新个体的过程,需要用到植物组织培养技术;逆转录法获得的目的基因没有内含子。
答案:(1)农杆菌转化法 启动子 终止子
(2)限制酶Ⅱ GATC—(或—CTAG)
(3)植物组织培养 目的基因片段中含有内含子
3.(2015河北邢台四模)下面是以小鼠为对象进行的各项研究工作,请分析回答问题。
(1)在小鼠细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面 时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的 。此时,瓶壁上形成细胞层数是 。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来,需要用酶处理,可用的酶是 。?
(2)如果体外受精后,在精核与卵核融合之前,用微型吸管除雄核,再用细胞松弛素B处理(作用类似于用秋水仙素处理植物细胞),处理后的受精卵可发育成小鼠。这种方法在动物新品种选育中的显著优点是 。?
(3)为使外源基因在后代中长期保持,可将转基因小鼠体细胞的 转入 细胞中构成重组细胞,使其发育成与供体具有相同性状的个体,该技术称为 。?
(4)在细胞培养过程中,通常在 条件下保存细胞,因为在这种条件下,细胞中 的活性降低,细胞的代谢速率降低。?
解析:(1)动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。此时,瓶壁上形成细胞层数是单层。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来,需要用胰蛋白酶(或
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