第九章弧菌属螺杆菌属和弯曲菌属技术报告.docVIP

第九章 弧菌、螺杆菌与弯曲菌属 第一节 霍乱弧菌 弧菌属（Vibrio）细菌是一类菌体成弧形的短小革兰阴性菌。在自然界广泛分布，尤以水中含量最多。根据国际通用分类方法，可将弧菌属分为56个种，其中至少12个种可感染人类，又以霍乱弧菌感染最为严重。 霍乱我国法定甲类传染性疾病，霍乱弧菌（Vibrio cholerae）是其病原体。迄今为止，全球已发生7次大流行，前6次由古典生物型引起。最后一次由El-Tor生物型引起。 一、生物学性状 （一）形态与染色 从患者体内新分离出的细菌形态典型，呈弧形或逗点状，大小约（0.5~0.8）μm×(1.5~3) μm。多次传代培养后，细菌多呈杆状。G-。菌体无芽胞、有菌毛，个别菌株有荚膜，菌体一端有着生单鞭毛。悬滴法观察液体样本时可见呈穿梭样或流星状运动菌体。霍乱弧菌（二）培养特性 霍乱弧菌兼性厌氧，无严格营养要求，但在含氧条件下生长更好。对温度要求不高，18~37℃均可生长，因此可在野外环境下长期生存。该菌耐碱不耐酸，在pH9左右的碱性蛋白胨水或碱性琼脂平板上生长良好，而其他细菌不易生长，故多以碱性蛋白胨水富集增菌提高初次分离效率。霍乱弧菌与其他致病性弧菌的区别在于其可以无盐环境中生长。 触酶（过氧化氢酶）阳性，氧化酶阳性，产酸不产气。可代谢多种糖类，如葡萄糖、蔗糖和甘露醇，不利用阿拉伯糖；可还原硝酸盐，吲哚反应阳性。碱性琼脂平板培养后可形成圆形、透明或半透明的无色扁平菌落。在TCBS（thiosulfate-citrate-bile-sucrose）培养基上菌落呈黄色，培养基呈暗绿色。 （三）抗原构造与分型 霍乱弧菌有两种抗原：O抗原（菌体抗原）和H（靶毛抗原）抗原。O抗原耐热，有155个血清群，其中O1群、O139群可引起霍乱，但两者无抗原交叉性，其余血清群可引起人类肠胃炎等疾病。H抗原不抗热的，无特异性。 根据菌体抗原因子不同，O1群又可分为3个血清型：小川型（A抗原因子）、稻叶型（B抗原因子）、和彦岛型（C抗原因子）。 根据表型差异，O1群霍乱弧菌血清型还可分为2个生物型：古典生物型（classical biotype）和El Tor生物型（EL Tor biotype）。古典生物型多粘菌素敏感，不溶解羊红细胞，不凝集鸡红细胞，可被第Ⅳ群噬菌体裂解。El Tor生物型多粘菌素不敏感，溶解羊红细胞，凝集鸡红细胞，不被第Ⅳ群噬菌体裂解。 （四） 抵抗力 霍乱弧菌对热敏感，煮沸2分钟或60℃加热10 分钟可致死；O1群El Tor生物型和其他非O1群霍乱弧菌在自然界中的生存力比O1群古典型强，在淡水水中可存活1~3周或更长。霍乱弧菌对一般消毒剂敏感，0.5ppm氯15分钟即可致死，故以1:4比例加漂白粉处理病人排泄物或呕吐物1小时，可达消毒目的。不耐酸，在胃酸中仅存活4分钟。 二、致病性与免疫性 （一）致病物质 霍乱弧菌的致病物质涉及染色体上多个基因，可分为两大类，一是由ToxR蛋白调控的ctxA 、ctxB、zot、cep、ace、tcp等基因；二是不受 ToxR蛋白调控的毒力因子基因 hly A和 hap。 1． 霍乱肠毒素(cholera toxin)：是致泻毒素中最为强烈的毒素。 该毒素由一个 A亚基（cholera toxin A，分子量为27.2kDa）和5个相同的 B亚基 (每个亚单位分子量为 l l.7kDa) 组成。该蛋白热不稳定，A亚基和B亚基分别由前噬菌体携带的结构基因 ctxA 和ctxB 编码。霍乱弧菌O1群古典生物型染色体上广泛散布着CTX单元（2个拷贝 ctx 为一组）； O1群El Tor 生物型染色体上 CTX单元为多拷贝随机分布。霍乱肠毒素的致病机理是：B亚基与小肠黏膜上皮细胞的 GMI神经节苷脂受体特异性结合，从而介导 A亚基进入细胞，经蛋白酶作用裂解为 A1和A2两条多肽，A1作为腺苷二磷酸核糖基转移酶可使 NAD（辅酶 I）上的腺苷二磷酸核糖转移至G蛋白上，激活腺苷酸活化酶，使细胞内ATP转化为 cAMP，cAMP水平升高，使细胞主动分泌 Na+、 K+、 Cl-、HCO3-等离子和水，最终导致患者出现严重的腹泻和呕吐。另外，由 zot编码的紧密连接毒素能破坏小肠黏膜细胞间的紧密连接，增加黏膜的渗透性； cep编码的副霍乱肠毒素可增加肠液的分泌。 霍乱肠毒素2．鞭毛、菌毛及其他毒力因子：鞭毛有助于霍乱弧菌穿过肠黏膜表面黏液层到达肠壁上皮细胞。细菌菌毛有助于细菌定居于小肠。与此相关的基因有 acf (accessory colonization factor)和 fcpA(toxin coregulated pilus A)。acf编码黏附素，tcpA编码菌毛蛋白中分子量约为20kDa的亚单