扫描电镜样品制备教案分析.ppt

实验十一 扫描电镜样品制备 选作 二、实验用品 材料 植物的的根、茎、叶或动物的脏器等。 2. 试剂 丙酮、乙醇、2％戊二醛溶液、1％锇酸、0.1mol/L PH7.2磷酸缓冲液、醋酸异戊酯、液体二氧化碳、导电胶等。 3. 器材 扫描电镜、 临界点干燥法、真空喷镀仪、青霉素小瓶、培养皿、载玻片、牙签、脱脂棉等。 三、扫描电镜样品的制备 取样： 将取下的动植物组织放入预冷的含有2％戊二醛溶液的载玻片上，用刀片将组织块切成长4mm左右、高3mm左右的小块。 2. 样品的清洁： 把载玻片上切好的样品快，用牙签轻轻地逐个拨入盛有0.1mol/L PH7.2磷酸缓冲液的青霉素小瓶中漂洗，并反复更换用于清洗的缓冲液，一般漂洗1小时，换液3-4次。 3. 样品的固定 样品的固定、漂洗和脱水等处理所用的试剂和方法基本上与透射电镜的样品相同，但由于扫描电镜观察的是样品的表面，主要是要求保持样品表面的原貌，因此，在固定、漂洗和脱水过程也与透射电镜样品处理有不同之处。 一般在4℃的条件下完成固定比较好， 戊二醛、锇酸均可单独固定，也可用“戊二醛-锇酸”双重固定法。 固定1-3小时（依样品种类和固定剂而已）后，吸出固定液， 加入0.1mol/L PH7.2磷酸缓冲液，漂洗1小时，换液3-4次。 4. 脱水 从小瓶中吸出缓冲液， 加入乙醇逐级梯度脱水，脱水剂的乙醇浓度依次为30%－50%－70%－80%－