第十一章自动化技术解析.pptVIP

* 4. 应用范围及功能 仪器的应用范围:指所能进行的分析方法以及可测定项目的种类。 分析方法除了分光光度法外，还能进行浊度法、离子选择性电极法、荧光法等测定。既可用终点法，也可作动态法检测。 可测定项目，早期常规的生化检验指标，近年来免疫浊度法测定特种蛋白、药物监测的分析和微量元素测定 很多分析仪还具有一些特殊的功能 双波长和多波长的测光技术 双试剂功能 多种校准及质量控制功能 * 5. 其它性能 仪器的取液量、最小反应液体积、反应时间、可测吸 光度范围。 试剂的使用是封闭式还是开放式 仪器的性能价格比、条码识别功能等。 检测能力,检测范围等 * (二)自动生化分析仪的评价 精密度评价 波长检查 相关性 * 1. 精密度评价 内容：批内重复性和总精密度两个方面，反映仪器的测定结果的精密度。 批内重复性 测定批内重复性就是对样品的某一个或几个项目各重复测定20次，计算它的CV值即精密度，然后与厂家的该项技术指标进行比较。 总精密度 以血糖为例，选择两个浓度(有医学决定水平的正常和异常值)，每天测定2批，每个浓度各平行两次，两批之间的时间间隔不少于2小时，连续20天，要求每天必须做室内质量控制。然后计算总精密度(ST)。 * 2. 相关性 内容：有两台仪器以上的实验室，应该进行仪器间结果的比较。若仅有一台仪器，为了得到实验室之间的一致性，也可以用参考实验室的仪器进行比较。 方法：相同的试验项目在不同的仪器上测定．然后用线性回归进行比较和校正。 * 3. 波长检查 内容：包括线性和准确性的检查。 线性检查方法是用系列标准溶液在最大吸收处读取吸光度，然后绘制标准曲线或用回归法计算线性相关。 准确性检查的方法有两种： ①用已知准确摩尔浓度和摩尔消光系数(ε)的溶液在其特定 波长比色，ε=A值／摩尔度，然后与标准ε比较。 ②与已知准确波长的仪器比较，如有漂移，应进行适当的校正。 * 七、自动生化分析仪分析方法 一点终点法 二点终点法 连续监测法 * (一)一点终点法 原理：使用一种或两种试剂，当样品和试剂混合后，待测物与试剂的物理化学反应达到终点时，测定一次吸光度，计算待测物的浓度。 应用：该法具有代表性的试验有总蛋白、白蛋白、葡萄糖氧化酶法等 双试剂一点终点法反应示意图 * （二）两点终点法 二点终点法也称固定时间法，它可以用一种或二种试剂。 单试剂二点法，在样品与试剂混合后的延滞期后读取A1，一定时间后读取A2，A= A2- A1。 双试剂二点法，属于试剂启动法，原理是加入样品—试剂1—读取A1，加入试剂2—读取A2，也是读取两次吸光度，第一次是相当于读出样品空白的值，加入试剂2至第二次读数才是实际呈色反应，因此A= A2- kA1。 特点：可以消除样品、试剂的颜色、浊度，和一些干扰物质对测定的干扰。 * * 3.比浊法 比浊法也是一种终点法．不过是一种浊度测定，比浊法可用于化学比浊法和免疫比浊法。免疫比浊法又分为透射比浊和散射比浊 目前常用的免疫比浊法主要用于血清特种蛋白的检测，如载脂蛋白、微量蛋白、急性时相反应蛋白，免疫球蛋白等，以及某些药物监测。 * 4.双波长法 原理:是检测计在对一待测物进行检测时，同时用两个波长检测，用主波长的吸光度减去副波长的吸光度．标准物与待测物同等对待，计算待测物的浓度。 优点:是可以通过消除背景吸收，而减少样品的颜色和浊度所产生的影响，它不仅可以有效地校准样本的混浊、溶血、黄疸等，还可对电源波动有补偿效果。 * (二)连续监测法 特点：连续监测法属于动态法检测，适用于酶活性检测，此法是通过适当的仪器，连续测定酶促反应过程中某一反应产物或底物的浓度随时间变化的情况。 原理：是在酶反应的最适条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反应速度恒定期(零级反应期)和反应呈线性期来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物量的变化，以单位时间酶反应初速度计算出酶活力的大小。 计算方法有两种： ①绝对法：酶活力(u／L)=△A×(反应液体积／样品体积)×(1000／消光系数) ②相对法：酶活力(U／L或mmolI／L)=[△A(测定)／△A(标准)]×标准物的活力或浓度 * 1．两点速率法 观察两个时间点的吸光度，与单试剂二点法相似，但必须是在零级反应期和线性期。用两个吸光度的差值(A)除以时间(分)，计算出每分钟的吸光度值。 * 2．多点速率法 在酶促反应进程的零级反应期间每隔一定时间(2秒～30秒)进行一次监测，连续监测多次，求出单位时间内的反应速度即△A。 速率A法也称最小二乘法，它是用最小平方法求得每分钟的吸光度变化(△A)，从而求出浓度或活性值，是全自动生化分析仪上最常使用的速