120308植物叶绿体纯化试剂盒使用手册V1点0.doc - 北京天恩泽.docVIP

细胞生物学系列 CAT#:120308-15 常温运输保存, 保存期限 植物叶绿体纯化试剂盒 Plant Chloroplast Isolation Kit 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26号中关村创业大厦（中关村留学生创业园）506室 QQ:座机电话号码3，座机电话号码1（销售），1座机电话号码0（技术）， 电话： 座机电话号码，座机电话号码（销售），1座机电话号码51（技术），order@ 产品及特点 叶绿体是重要的，负责植物光合作用的细胞器，很多重要的特性 如雄性不育 也跟叶绿体相关，所以叶绿体是研究植物生理和母系遗传的重要材料。对植物叶绿体进行生化，遗传和分子生物学研究都需要进行叶绿体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的，专门用于从植物叶片中纯化完整叶绿体的试剂盒。它具有下列特点： 即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。 规格及成分 成 份 15次大盒包装 溶液A成分一 250 mL×2 溶液A成分二（干粉） 3 g 溶液B 100 mL 带柄尼龙滤膜 1个 使用手册 1份 运输及保存 常温运输，4℃保存, 保存期限 自备试剂 去离子水。 使用方法 注意：叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能，提取过程还需要在昏暗的光线条件下进行。 实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净，再用蒸馏水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。 新鲜（实验当天）制备溶液A：将自备的去离子水与溶液A成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入溶液A成分二干粉到终浓度0.1%（每100 mL中加入0.1 g干粉），摇晃溶解后所得溶液即为溶液A，冰上预冷待用。一次实验（从30 g叶片提取叶绿体）所需要的溶液A体积跟材料不同而不同。 新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3 cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的溶液A中（每克叶片加4 mL溶液A，但对烟草和大豆，每克叶片需要加4 mL溶液A）。 将浸泡了叶片的溶液A转移到Waring匀浆机（即家用制备果汁的匀浆机）中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：除Waring匀浆机外，还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨（加玻璃珠）等裂解细胞的方法，但这些方法的单次处理量都比较小，需要将样品分成很多小份单独匀浆，然后再汇集。 用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，可先将滤液收集到预冷的200 mL量筒中，再等分到4个预冷的50 mL的塑料离心管中（每个管中的滤液不要超过35 mL） 关联产品 柱式植物叶绿体DNAout （CAT#：120406）