细胞活体染色技术精读.ppt

细胞活体染色技术 实验目的 学习细胞活体染色的方法。 观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。 实验原理 活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。 活体染色 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将染料注射于生物体内，染色后再取材观察。后者是取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持离体细胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度，渗透压，PH等。 较为常见的活体染色剂 詹纳斯绿B(Janus green B) 中性红 台盼蓝(trypan blue) 詹纳斯绿B(Janus green B) 能够染活线粒体为蓝色，主要是由于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染料始终保持在氧化状态(即有色状态)，在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 一定要注意，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色 中性红 中性红是液泡系的特殊活体染色剂，它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色，在细胞处于生活状态下细胞质和核不被染色，该染料对液泡系具有一定专一性。 台盼蓝(trypan blue) 台盼蓝(trypan blue)是一种偶氮类酸性染料，它可以通过死亡细胞的质膜而使细胞着色，但不能通过活细胞的质膜，故可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞。 实验用品 材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、 表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、收水纸等。 试剂：Ringer氏液 1／3000中性红溶液 1／5000詹纳斯绿B 台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等 实验方法 1. 液泡系的中性红活体染色 液泡系的中性红染色点经观察 .线粒体的活体染色⑴ 用植物细胞观察线粒体的活体染色 撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 ↓ 于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检 3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000 Janus green B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓ 染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察 人口腔上皮细胞的线粒体分布 4. 台盼蓝染色鉴定细胞死活 取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓ 滴加1%台盼蓝1滴 ↓ 盖上盖玻片于显微镜下进行镜检 thanks * * * 实验七 生物工程 周新宇 1．用双面刀片将黄豆芽根尖 (约l-2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄且均匀。 2．在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5-10分钟。 3．吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色， 其形态、大小如何、分布位置。 取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块， 放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹没。染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜检。用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的染色才显得非常清楚。 ⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色 口腔黏膜上皮细胞及线粒体 在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于０℃～４℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。 * * * *