生物化学实验预案.ppt

实验 血糖的定量测定（Folin-Wu法） 无蛋白血滤液中的葡萄糖与碱性硫酸铜共热，Cu2+即被血滤液中的葡萄糖还原成Cu+（Cu2O），Cu2O又使钼酸试剂还原成低价的蓝色钼化合物（钼蓝）。血滤液的糖含量和产生的Cu2O成正比，Cu2O的量与形成钼化合物的量成正比，可用比色法测定。 碱性硫酸铜溶液 A液：无水碳酸钠35g，酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水后，稀释至约700mL，溶液清晰后稀释至1000mL。 B液：晶体硫酸铜5g，溶于水并稀释至100mL，加数滴浓硫酸作稳定剂。 临用时，A液：B液=15：1（V/V）混合，保存于冰箱（太阳下数小时失效） 0.33mol/L H2SO4溶液：于53mL水中加入1mL浓硫酸 葡萄糖标准液（0.1mg/mL） 10%钨酸钠溶 实验 醋酸纤维素膜电泳法分离牛血清蛋白 蛋白质是两性电解质，在pH小于其等电点的溶液中，为正离子，在电场中向阴极移动，反之则向阳极移动。 血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等多种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，同时由于相对分子质量的不同，造成在电场中移动速度不同，故可利用电泳法分离 。 在一定范围内，蛋白质的含量与结合的染料量成正比，可以进行比色定量。 巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，0.075M）：巴比妥2.76g和巴比妥钠15.4g溶于1000mL蒸馏水，pH校正后用； 染色液：氨基黑10B 0.5g，甲醇50mL，冰乙酸10mL，蒸馏水40mL，混匀； 漂洗液：乙醇45mL，冰乙酸5mL，蒸馏水50mL，混匀； 实验 酵母RNA的提取及鉴定 酵母核酸中RNA含量较多，DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液，当碱被中和后，可加乙醇使其沉淀，由此可制得粗RNA制品。 在酸性条件下，RNA分子中的核糖基转变成α-呋喃甲醛，后者与苔黑酚（3,5-二羟甲苯）作用生成绿色复合物。可用比色法定量。当核糖核酸浓度在10-100μg/mL范围内，其浓度与吸光值呈线性关系。 苔黑酚-三氯化铁试剂：100mg苔黑酚溶于100mL浓盐酸中，再加入100mg FeCl3.6H2O，现用现配。 实验 维C的定量测定（2,6-二氯靛酚滴定法） 维生素C又称抗坏血酸，还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。 2,6-二氯酚靛酚钠盐水溶液呈蓝色，在酸性溶液中呈玫瑰红色，当其被还原时就变为无色。因此可用2,6-二氯酚靛酚滴定样品中还原型抗坏血酸，当抗坏血酸完全被氧化后，稍多加一点染料，使滴定液呈淡红色，即为终点。 如无其它杂质干扰样品，提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。 抗坏血酸标准溶液（0.1mg/mL）：准确称取10.0mg纯抗坏血酸，溶于1%草酸溶液，并稀释至100mL。贮于棕色瓶，冷藏，现用现配。 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液：500mg 2,6-二氯酚靛酚溶于300mL含有104mg NaHCO3的热水中，冷却后用水稀释至500mL，滤去不溶物，贮于棕色瓶，冷藏，每次用时，用标准抗坏血酸溶液标定。 * * 掌握Folin-Wu法测定血糖含量的原理和方法 学会制备无蛋白血滤液 1 2 实 验 目 的 一、实验原理 二、试剂与设备 复习蛋白质的相关理论知识 掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的方法 1 2 实 验 目 的 一、实验原理 蛋白质名称 等电点 相对分子量 α2-球蛋白 5.06 300000 β-球蛋白 5.12 90000-150000 γ-球蛋白 6.85-7.50 156000-300000 α1-球蛋白 5.06 200000 白蛋白 4.88 69000 二、试剂与设备 血清 醋酸纤维薄膜 镊子 载玻片 电泳仪 电泳槽 点样管 掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法 掌握苔黑酚法鉴定RNA的原理和方法 1 2 实 验 目 的 一、实验原理 二、试剂与设备 干酵母粉（市售） 乙酸 pH试纸 无水乙醚 95%乙醇 0.2%NaOH溶液 10%硫酸 氨水 5%硝酸银（棕色瓶保存） 离心机 烧杯 电炉 漏斗 量筒 移液管 玻璃棒 天平 吸管 了解滴定法测定含量的方法 掌握2,6-二氯酚靛酚法测定Vc的原理和方法 1 2 实 验 目 的 一、实验原理 二、试剂与设备 吸管 容量瓶 移液管 电子天平 研钵 漏斗 滴定管 2%草酸溶液 1%草酸溶液 1%HCl 新鲜水果