实验1MS培养基贮备液的配制及不同外植体诱导培养基配制预案.pptVIP

实验1 MS培养基贮备液的配制及不同外植体诱导培养基配制 要求掌握： 1、培养基各种母液的配制方法 2、培养基配制技术 3、高压灭菌锅、pH计、电子天平等仪器的使用 一、母液配制 1、10×大量母液 1升 1组 2、100×微量母液 1升 2组 3、100×铁盐母液 0.5升 3组 4、100×有机母液 0.5升 4组 5、6-BA母液 0.5mg/ml 50ml 1MNaOH 5组 6、KT母液 0.2mg/ml 50ml 1MHCl 6组 7、NAA母液 0.2mg/ml 50ml 7组 8、2,4-D母液 0.2mg/ml 50ml 8组 注意事项： 1. 用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂 2 .注意防止沉淀 3.激素溶解方法： NAA 2,4-D先溶95%酒精再加水定容； KT、BA先溶于少量1MHCl再加水。 胡萝卜愈伤组织诱导培养基配方 H MS+2,4-D1.0+KT0.2 +30g蔗糖+5g琼脂 pH5.8 思考题 1、如何使用高压蒸汽锅，应注意哪些事项? 2、配制大量元素母液如何防止沉淀？ 3、培养基不凝固原因？ 4、现有20×大量元素母液；100×微量元素母液；50×铁盐母液；50×有机物母液；2mg/ml6-BA、1mg/mlNAA激素母液。 如何配制2升下列配方的培养基? ①MS+6-BA1.0+NAA1.0+30g蔗糖+6g琼脂 ②1/2MS+6-BA0.5+NAA0.2+30g蔗糖+6g琼脂 ③1/4MS+6-BA2.0+NAA0.2+30g蔗糖+6g琼脂 * MS培养基母液的配制 10000 100 肌醇 50 0.5 烟酸 50 0.5 盐酸吡哆素 40 0.4 盐酸硫胺素 10 100 200 2 甘氨酸 有机成分 3725 37.25 Na2EDTA.2H2O 10 100 2785 27.85 FeSO4.7H2O 铁盐 2.5 0.025 CoCl2.6H20 2.5 0.025 CuSO4.5H2O 25 0.25 Na2MoO4.2H2O 83 0.83 KI 620 6.2 H3BO3 860 8.6 ZnSO4.7H2O 10 100 2230 22.3 MnSO4.4H2O 微量元素 4400 440 CaCl2.2H2O 1700 170 KH2PO4 3700 370 MgSO4.7H2O 16500 1650 NH4NO3 100 10 19000 1900 KNO3 大量元素 每升培养基用量（ml） 母液扩大倍数 每升母液用量（mg） 培养基配方（mg/l） 成分 母液名称 （二）培养基配制 移母液 调PH值 培养基熬制 灭　菌 称蔗糖 扎　口 定　容 分　装 接　种 确定配方 称琼脂 非洲紫罗兰芽诱导培养基配方 （F）MS+BA0.1+NAA0.1+30g蔗糖+5g琼脂 pH5.8 分 8组，每组配制0.5L，分装28瓶。前4组配H培养基，后4组配F培养基。 大量元素母液 微量元素母液 铁 盐母液 有机物母液 取100ml 取10ml 取10ml 取10ml 注：MSo培养基配制 移母液 配１升培养基 培养基熬制： 将定容好的培养液倒入　锅中，加入琼脂，边煮边搅拌，防止糊底。 调PH值：用0.1MNaOH或HCl调PH值为5.8。 分装： 趁热分装，100ml的三角瓶约装入30－40ml, 30瓶/L。 扎口与灭菌: 要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作 培养基应及时灭菌，防止变质。 *