2-1微生物的实验室培养解析.ppt

* * * * * 1、灼烧灭菌： 接种环、接种针、试管口、瓶口 2、干热灭菌： 玻璃器皿和金属用具 3、高压蒸汽灭菌： 100kPa、121 ℃下维持15-30min. (2)灭菌的方法： 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 旁栏思考 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 1. 器具的灭菌 2. 培养基的配制 3. 培养基的灭菌 4. 倒平板 5. 微生物接种 6. 恒温箱中培养 7. 菌种的保存 实验操作 三、实验操作之大肠杆菌的纯化培养 1、制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌) 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL 1．计算 2. 称量 3．溶化 操作步骤 4．灭菌: 将培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅。 将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 （定容之后调PH） 5．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过快挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 1. 器具的灭菌 2. 培养基的配制 3. 培养基的灭菌 4. 倒平板 5. 微生物接种 6. 恒温箱中培养 7. 菌种的保存 整理实验操作 1、平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 在数次画线后,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落. 2、纯化大肠杆菌 微生物接种的方法： 平板划线法和稀释涂布平板法 单个微生物在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。(一种微生物形成一种菌落。) 微生物的菌落 每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。 特征： 大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。 功能： 定义： 有鞭毛细菌菌落 无鞭毛细菌菌落 无鞭毛的球菌，常形成较小较厚边缘较整齐的菌落，有鞭毛细菌形成大而扁平、边缘波浪或锯齿状菌落 菌落 细菌的菌落特征因种而异 思考与讨论： ①在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 ②整个操作过程中的接种次数？灼烧次数？ 接种1次，灼烧6次 ③灼烧之后为什么要等其冷却后再进行划线？ ④在做第二次划线及以后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 高温会将微生物杀死 充分使微生物分离开来 ⑤整个操作置于火焰旁的原因？ 防止培养基被杂菌污染 2、稀释涂布平板法 菌落在30-300适宜计数 计算：已知在稀释度数106的培养基中，现0.2ml溶液中有菌落50个，求原溶液1ml中有多少个微生物？ 2.5X108 讨论： ①第2步（涂布）应如何进行无菌操作？ 酒精灯与培养皿的距离要合适；吸管头不要接触任何其他物体；吸管要在酒精灯火焰周围。 ②怎样检测所用的培养基合格（无菌）？ 设置空白对照，不接种任何微生物，相同条件下培养，观察有无菌落出现 将接种的培养基和未接种的培养基都放在37度恒温箱，培养12h和24h,观察并记录结果。 平板划线法 稀释涂布平板法 结果分析与评价 1.未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有菌落生长，说明了什么？ 2.在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观