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实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察
实验五 植物细胞骨架的光学显微镜观察
【实验材料】
1.器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯；
2.实验材料：洋葱鳞茎；
3.试剂：
1） pH6.8的磷酸缓冲液；
索伦森（Sorensen）磷酸缓冲液
溶液A：Na2HPO4·2H2O 11.876g加蒸馏水至1L
溶液B：KH2PO4 9.08g加蒸馏水至1L
对照下表取一定体积的溶液A，再加入足够的溶液B至总体积达100ml，即得到所需pH的缓冲液。
溶液A pH 溶液A pH 溶液A pH 0.6 4.9 49.2 6.8 81.8 7.4 2.3 5.3 61.2 7.0 85.2 7.5 4.9 5.6 67.0 7.1 88.5 7.6 12.1 6.0 72.6 7.2 93.6 7.8 26.4 6.4 77.7 7.3 96.9 8.0 2）M-缓冲液 ：50mmol/L pH?6.7 咪唑、 50mmol/L KCl?、?0.5mmol/LMgC12? 、 1mmol/L ?EGTA?、0.1mmol/L EDTA?、?1mmol/L巯基乙醇、 4mmol/L甘油??、1mol/L?HCl?调pH?至7.2。
3）1%TritonX-100：用M-缓冲液配制。
4）3%戊二醛：用pH6.8的磷酸缓冲液配制。
5）0.2%考马斯亮蓝R250?染液：0.8g考马斯亮蓝R250、46.5ml甲醇、7ml冰醋酸?、46.5ml蒸馏水。 6）50％，70％，95％乙醇
7）叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶
【实验方法】
取材：撕取洋葱鳞茎内表皮0.5～1cm2，浸入装有磷酸缓冲液（PH6.8）的小烧杯中，处理5～10分钟。
去垢处理：弃去PBS缓冲液，用吸水纸吸净剩余的PBS，加适量1%Triton X-100，使液体充分浸泡材料，并立即放入37℃恒温箱或水浴锅中处理30分钟。
冲洗：吸去1%Triton X-100，立即加入M缓冲液轻轻冲洗3次，每次3～5分钟。
固定：用吸管将M缓冲液吸尽，加入3%戊二醛，固定10～20分钟。
冲洗：吸去3%戊二醛固定液，用磷酸缓冲液（pH6.8）冲洗3次，每次3～5分钟。
染色：吸去PBS缓冲液，加入适量0.2%考马斯亮蓝R250染料，染色10～20分钟。
制片：吸去染料，用水冲洗（注意不要将材料丢失）。将洋葱表皮伸展铺平于载玻片上，加盖盖玻片。
镜检：将制好的片子置于低倍镜下，可见到规则排列的长方形洋葱表皮细胞轮廓，细胞质内可见到被染成蓝色的粗细不等的分枝状结构，这便是细胞骨架。转高倍镜继续观察，调节细螺旋可见到细胞骨架的立体结构。
【实验结果与分析】
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