超临界流体色谱对异黄酮的分离.docx

药物与生物医学分析杂志107 （2015）364-369 题目：超临界流体色谱对异黄酮的分离 作者：Markus Ganzera，奥地利因斯布鲁克大学，药学、生药学研究所 文献信息： 收到来稿 2014-10-30 收到修订稿 2014-12-23 审核通过 2015-1-6 网上发布 2015-1-14 关键词：异黄酮、超临界流体色谱、手性、葛根、大豆 摘要：第一份关于运用超临界液相色谱分析异黄酮的协议报道，在UPC2液相色谱仪的1.7m柱的条件下取得最佳结果，使用溶剂梯度的超临界二氧化碳和甲醇（以磷酸为添加剂）作为洗脱液进行洗脱。这种方法方法在八分钟内使九种异黄酮基线分离（多聚糖和苷类），也适用于膳食补充剂中大豆含量的测定（甘氨酸含量最多），红色格洛弗（三叶草）和葛根（野葛）。分析方法验证这个试验是具有要求的：线性（R2≥0.9994）、准确（回收率97.6~102.4%），以及精确的短期和长期水平（内精密度≤2.1%），并显示萨农柱的检测限为0.2 ng以下。 这连同其在实际样品分析上优秀的表现表明，超临界流体色谱适用于异黄酮复杂基体中快速、准确的测定。与既定的方法相比较，没有发现什么缺点。因此，超临界流体色谱至少应被视为在这种情况下的一个等效分析替代方法。 介绍： 异黄酮是一种非常小，但在结构和药理性质上都很特殊的一种天然化合物。与普通黄酮类物质相反，它们有三苯基四氢结构，其中苯基部分是位于苯并吡喃环上的C-3而不是通常的取代的C-2（图1）。这种结构结构的改变源于一种类似于激素的机制（它们被分配到植物雌激素组），这说明它们的使用可以治疗或减少更年期和更年期后的的一些症状，比如阵发性皮肤炽热[1]、骨质疏松[2]或者情绪波动[3]。 食用含异黄酮丰富的食物（如大豆）甚至可以普遍降低一些亚洲地区的乳腺癌的发生率 [ 4 ]，也可抑制阿兹海默症的进一步恶化[ 5 ]。从文献数据资料来看，是不可能完全确信这些指标的，因为许多药理研究没有观察到这种影响[6,7]。异黄酮主要在豆科植物族中被发现的，与医疗相关的例子是红车轴草（三叶草），葛根（野葛）或大豆（甘氨酸含量最多）。 许多分析技术已成功地用于不同基本物质的异黄酮的分离（如植物原料，保健产品，血浆、尿液），包括薄层色谱法[ 8 ]，气相色谱[ 9 ]，毛细管电泳（CE）[ 10 ]。高效液相色谱法在之前从来没有被评测过，而是超临界流体色谱（SFC）这种技术，由于许多理想的特性（见3节）而日益成为受欢迎的常规分析方法。 在这种方法中，以一种超临界流体作为流动相进行高效液相色谱的分离，这是一种常用方法。这需与SFE技术（超临界流体萃取）区分开来，其中超临界流体，主要是二氧化碳，用于提取目标物质。后者已被描述为从大豆中的总异黄酮的富集[ 14 ]和其他基本物质[ 15 ]，但个别异黄酮的分析，还从未尝试过用超临界流体色谱法进行。 2．材料和方法： 2.1.样品、标准及试剂： 样品if2014-1到if2014-6，包括胶囊或片剂（膳食补充剂），含有大豆、红三叶草、葛根提取物或相应的植物原料，在2014年可从因斯布鲁克奥地利药店或在互联网上买到。来自phytolab（德国菲尔特）的以下标准化合物：鹰嘴豆素（A（1）、芒柄花素（2）、染料木素（3）、大豆黄素（4）、大豆苷（5）、染料木苷（6）、大豆异黄酮（7）、大豆苷（8）和葛根素（9）；图1），拥有98.3%或更高的纯度。超临界流体色谱法中用4.5级二氧化碳（纯度99.995%≥；梅塞尔，贡波尔茨基兴、奥地利）和磷酸甲醇为流动相。后边两者都是分析纯级别，从默克公司（德国，达姆施塔特）购买。 化合物 R1 R2 R3 R4 R5 鹰嘴豆芽素 (1) H OH H OH OCH3 刺芒柄花素 (2) H OH H H OCH3 金雀异黄素 (3) H OH H OH OH 黄豆黄素(4) H OH OCH3 H OH 大豆苷元(5) H OH H H OH 染料木苷(6) H ?-D-glc H OH OH 黄豆黄甙(7) H ?-D-glc OCH3 H OH 大豆苷(8) H ?-D-glc H H OH 葛根素(9) ?-D-glc OH H H OH 图1.异黄酮的化学结构的研究 2.2、样品制备： 取出一粒胶囊的内容物或取一片药片在砂浆细磨平板上，取15毫升甲醇/水混合液（8 / 2，v/v）在室温下与之超声混合10分钟。然后，样品离心（3000转，10分钟）和超级上清液倒入50毫升容量瓶。这个过程需再重复2倍的时间，最终提取溶剂添加到瓶身刻度线。提取的协议是相同的一个已经验证，并发表的，确保从植物材料中提取的异黄酮的详尽的[ 16 ]。由于高含量的大豆异黄酮（if2014-1和个人两样本i