单克隆抗体制备操方法及注意事项- JEN.docVIP

无菌室清洁要求：1、进入无菌间，须更换白大褂，口罩、鞋套必须戴上，最好戴上帽子、手套； 2、进去后用酒精棉球擦洗手； 3、生物安全柜常用酒精棉球擦洗，擦后棉球不显黑；柜内垃圾当日及时清理；柜内所有实验操作应在酒精灯前进行；经常紫外杀菌； 4、无菌间物件传递，经窗口紫外照射方可； 5、有关试剂使用后及时用封口膜封住； 6、细胞培养盖子旋松，以便二氧化碳气体进入；拿瓶、加液体均需注意瓶口，避免污染瓶盖； 7、出门后需要用钥匙锁上； 8、整个无菌间两周清洁一次； 免疫动物：选择与瘤细胞同一品系的动物做为免疫对象，现在常用的是Balbc/c小鼠，6-8周龄，一种抗原一次性注射2-3只小鼠，小鼠不宜过大，雌性相对较好； 首次注射抗原100微克与等体积弗氏完全佐剂混匀，在背部两侧皮下与腹腔分别注射，形成几个小泡； 间隔两周左右时间（14天） 二次免疫注射抗原50微克与等体积弗氏不完全佐剂混匀，在背部皮下及腹腔分别注射，通常上次背部小泡仍然存在； 间隔两周左右时间（14天） 三免小鼠注射抗原50微克与等体积弗氏不完全佐剂混匀，在背部皮下及腹腔分别注射，通常上次背部小泡仍然存在； 间隔7-10天左右时间 尾部采血测定抗体效价： 方法一：手拇指和食指从背部抓住小鼠颈部皮肤，将小鼠头朝下，小鼠保定后将其尾巴置于50°热水中浸泡数分钟，使尾部血管充盈。擦干尾部，再用剪刀或刀片剪去尾尖1～2mm，用试管接