会运用高效液相色谱分离检测的技术.pptVIP

4．电极和溶液控制系统 (1）电极----置于两侧的电泳池中铂丝电极 (2）溶液控制系统 自动进样器 分部收集器 更换缓冲液装置 缓冲液的水平系统 5．检测器 紫外-可见光检测器 二极管阵列检测器 荧光检测器 质谱检测器 电化学检测器 激光类检测器 三、毛细管电泳法的模式及应用 名称 缩写 管内填充物 分离分析对象 毛细管区带电泳 CZE pH缓冲的自由电解质溶液（可含添加剂） 无机离子、有机物、对映体拆分、各种生物分子 胶束电动毛细管电泳 MECC CZE载体+带电胶束 小分子、中性分子、对映体拆分 毛细管凝胶电泳 CGE 电泳用凝胶或其它筛分介质 蛋白质、核酸、聚合酶链反应产物、寡聚核苷酸 毛细管等电聚焦 CIEF pH梯度两性电解质 等电点差异小的蛋白质、氨基酸 毛细管等速电泳 CITP 区带前后使用两种不同缓冲液 离子型化合物 毛细管电色谱 CEC CZE载体+液相色谱固定相 离子型化合物、有机物、大分子、手性化合物 非水毛细管电泳 NACE 含电解质的非水体系 弱极性、中性分子，能与质谱联用 第5节 应用案例 一、分离方法初选 二、应用案例 案例10-1 RP-HPLC法测定脂降宁片中葛根素、二苯乙烯苷的含量 想一想 1.色谱条件应包括哪些项目？ 2.本案例的色谱系统适用性验证了哪些项目? 3.测定条件如何选择? 案例10-2 大鼠生殖细胞中多胺的测定 想一想 生物样品中组分测定与药品中组分的色谱测定有哪些方面不同？ 第10章 高效液相色谱分离检测技术 学习目标 知识目标 掌握化学键合相色谱法、离子色谱法和高效液相色谱的定性与定量分析方法；熟悉高效液相色谱仪的组成结构及其工作原理，了解毛细管电泳法、毛细管电泳仪组成结构、分离模式及应用和高效液相色谱分离方法选择与应用。 技能目标 掌握高效液相色谱仪使用操作技术，会运用高效液相色谱分离检测的技术，能对高效液相色谱仪进行简单维护。 第1节 高效液相色谱法的主要类型 HPLC 固定相状态分 液-固色谱法（LSC） 液-液色谱法（LLC） 分离机制分 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 分子排阻色谱法 化学键合相色谱法 亲合色谱法 离子色谱法 一、化学键合相色谱法 化学键合相（chemically bonded phase）将固定液（含不同官能团的有机分子）利用化学反应键合到载体表面上，使其形成均一、牢固的单分子薄层而构成的固定相 1．键合相类型 载体-----硅胶 类型 非极性固定相 (ODS） 极性键合相 （键合-NH2、-CN、醇基等极性基团） 离子型键合相 （键合可交换阴或阳离子基团 ) 键合反应---硅烷化反应、硅酸酯化反应 2．分离原理 （1）正相键合相色谱法 特征----固定相极性＞流动相极性 分离机制 ---类似液-液分配色谱的分离原理 应用范围---适于分离溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物(如脂溶性维生素、脂、芳香醇、芳香胺等） （2）反相键合相色谱法 特征----固定相极性＜流动相极性 分离机制 ---“疏溶剂作用”理论 应用范围-----适用于分离非极性至中等极性的分子型化合物 流动相-----有机溶剂 流动相-----水+有机调节剂 疏溶剂作用理论 利用非极性溶质分子或溶质分子中非极性基团和极性溶剂接触时产生排斥力，而从溶剂中被“挤出”，即产生疏溶剂作用，促使溶质分子与键合相表面的非极性的烷基发生疏水缔合，而使溶质分子保留在固定相中 . 想一想 影响溶质保留（时间长短）的因素有哪些? （1）溶质分子中非极性部分的总表面积 溶质和固定相接触的总表面积愈大，保留值愈大，所以溶质的极性愈弱，疏水性越强，保留值越大。 （2）键合相上的烷基总面积 烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用表面。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保留值也随烷基碳链长度的增加而增大。 影响溶质保留（时间长短）的四大主要因素 时间，min 固定相：C1 固定相：C8 固定相：C18 1-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯 （3）流动相的表面张力 流动相的表面张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保留值大。 （4）流动相的酸碱性和盐浓度 酸性抑制弱酸解离，增加保留时间；碱性抑制弱碱解离，增加保留时间；盐浓度增加不利于离子化溶质保留。 二、离子色谱法 1.离子色谱法（IC） 离子交换色谱与电导检测器相结合分析各种离子的方法 2．分离原理[抑制型（双柱型)] 分离柱 交换反应：R+-OH- + NaX → R+-X-+ NaOH