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大肠癌微卫星不稳定性及其临床意义 　　关键词：?结直肠肿瘤；微卫星DNA；微卫星不稳定性 　　【摘要】　目的　了解大肠癌微卫星不稳定性（microsatellite instability, MI）情况。方法　用6个微卫星位点检测PCR扩增所选位点PCR产物用8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染。结果　60例大肠癌中，20例表现MI，其中11例为复制错误（replication errors, RER）阳性。RER阳性与RER阴性大肠癌患者相比，发病年龄较年轻，一级亲属有恶性肿瘤病史者明显高于RER阴性，倾向位于结肠，呈浸润性生长，Ⅲ～Ⅳ期比例高。5例大肠癌伴大肠腺瘤病例中，4例腺瘤有MI。结论　中国人大肠癌MI发生率介于文献报道之间，MI为大肠癌形成过程中的早期分子事件，RER为肿瘤易感指标之一。 　　微卫星DNA 是大量随机分布于真核生物整个基因组中的1～6个简单重复核苷酸序列，微卫星不稳定性 microsatellite instability, MI 是指由于复制错误 replication errors, RER 引起的简单重复序列的增加或丢失，其在恶性肿瘤发生发展过程中的作用已受重视，被认为是大肠癌的一种发病机制。我们对60例大肠癌组织的MI进行了研究，并结合临床病理资料，探讨其临床意义。 　　材料与方法 　　1.标本收集和基因组DNA提取：自浙江医科大学第二附属医院肿瘤科1996年3月～1997年5月间经病理证实的大肠癌患者60例，男37例，女23例。年龄32～78岁，平均年龄 56±12 岁。按Dukes分期标准，Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期27例。现场取手术切除组织标本，立即置入液氮中保存，直至提取基因组DNA。每份标本包括肿瘤组织和相应的正常肠粘膜，基因组DNA提取采用蛋白酶k消化，酚氯仿抽提法。 　　2.MI检测：选用了D2S119、D13S160、D8S282、D3S1293、D2S123和D18S58等6个微卫星位点进行检测，PCR反应体系为50 mmol/L KCl,10 mmol/L Tris-Cl, 0.1%Trito X-100, 1.5 mmol/L MgCl2,200 μmol/L dNTPS,模板DNA200 ng，上下游引物各50 pmol，Taq酶1U，加去离子水至50 μl。PCR反应参数为：94℃变性5分钟，然后进入循环 94℃ 45秒，退火温度30秒，72℃ 1分钟 ，共35个循环，最后70℃延伸10分钟，4℃保存。PCR产物用8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳结束后进行银染。 　　3.判断标准：分析电泳图谱，MI表现为肿瘤组织相对于正常组织出现额外的条带、等位带产生迁移率的改变或等位带浓度增加。在检测的6个微卫星位点中，如果有两个或两个以上位点表现MI，则定义为RER阳性［1,2］。 　　4.统计处理：采用t检验、χ2检验和Fishers确切概率法，检验水准（α）定为0.05，统计在SPSS 6.0软件上完成。 　　结果 　　1.MI发生率：60例标本中,33.3%（20/60）表现MI，RER阳性11例，占18.3%。6个位点中，MI发生率依次为：D3S1293为18.3% 11/60 ，D2S123为13.3% 8/60 ，D8S282为13.3%（8/60），D18S58为11.7%（7/60），D2S119为11.7%（7/60），D13S160为6.7%（4/60）。本组收集到5例大肠癌伴大肠腺瘤病例标本，4例腺瘤检测到MI，其中2例腺瘤和腺癌均为RER阳性；2例仅腺瘤存在MI，而腺癌未检测到。 　　2.RER阳性大肠癌的临床特征：60例大肠癌中，发现RER阳性11例，年龄32～78岁，平均年龄 52±14 岁。RER阴性49例，年龄34～78岁，平均年龄 57±13 岁，RER阳性组比RER阴性组平均发病年龄小 P 0.18 。6例40岁以下的大肠癌中，RER阳性3例；54例40岁以上的病例中，RER阳性8例（P 0.069）。11例RER阳性大肠癌中，有4例一级亲属有恶性肿瘤病史，占36.4%；49例RER阴性病例中，也有4例一级亲属有恶性肿瘤病史，占8.2%； RER阳性病例有恶性肿瘤家族史的比例明显高于RER阴性（P 0.031 。 　　3.RER阳性大肠癌的病理特征：RER阳性组中，6例位于结肠，占54.5%，其中位于右半结肠5例。RER阴性组中，21例位于结肠，占42.9%，其中位于右半结肠12例，占24.5%。RER阳性病例中，隆起型1例，浸润型10例。RER阴性病例中，隆起型14例，占28.6%；浸润型35例，占71.4%。 RER阳性组中高中分化大肠癌8例，占72.7%；低分化3例，占27.3%。RER阴性组中高中分化38例，占77.6%；低分化11例，占2