第十三周周三化实验の8_纸层析-20130519.pptVIP

纸层析实验目的1了解纸层析的基本原理2掌握纸层析的基本操作技术实验原理纸层析：滤纸作为载体；固定相为纸纤维上吸附的水分；流动相为与水不相混溶的有机溶剂。把试样点在滤纸的原点位置上，当流动相溶剂在滤纸的毛细管作用下，连续不断地沿着滤纸前进通过原点时，试样中各组分便随着流动相溶剂向前移动，并在流动相和固定相溶剂之间连续发生一次又一次的分配。色谱法(Chromatography)：混合物中各组分在流动相与固定相间的分配比不同而使之分离结果，分配比较大的物质移动速度较快，移动的距离较远；分配比较小的物质移动速度慢，移动的距离较近。这样，便把试样中各组分分开聚集在滤纸的不同位置上。这种分离过程叫展开。因此，流动相溶剂又叫做展开剂。当分离的物质是有色的，如甲基橙，层析后在滤纸上可以直接看出它的色斑。当分离的是无色的物质，如氨基酸，就必须用显色剂使之显色。无色的氨基酸可以用茚三酮使之显红色，所用的茚三酮就是显色剂。样品经层析展开后，被分离的各化合物可通过它的Rf值（比移值）来鉴定。Rf值随各化合物的结构、滤纸的种类、展开剂、温度的不同而异。但在上述条件固定的情况下，对于某一化合物来说，Rf值是一个常数。故Rf值可作为定性鉴定的依据。仪器：层析缸层析滤纸直尺铅笔毛细管电吹风试剂：展开剂：正丁醇:醋酸:乙醇:水=4:1:1:2显色剂:1%茚三酮丙酮溶液样品:丙氨酸(2%)乙醇溶液丙氨酸(2%)和亮氨酸(2%)混合溶液丙氨酸：亮氨酸：实验仪器与试剂1、准备 在距滤纸一端约2cm处用铅笔轻轻划一横线作起点线，并在横线上标上A、B两点。注意：A、B两点不要太靠近滤纸边缘，以免产生边缘效应。在准备过程中手不要接触滤纸中部。实验步骤2、点样 用毛细管吸取已准备好的样品，毛细管垂直于纸面在标有A、B记号处，分别点两个样品，其中一个是丙氨酸样品，另一个是丙氨酸和亮氨酸的混合液。风干，按上述方法重复一次。注意：点的样直径不超过3mm，动作要轻，点一个样风干后再点另一个样。实验数据Rf=原点至层析斑点中心的距离原点至展开剂前沿的距离计算Rf测=？nml3、展开 将已点样的滤纸垂直挂于带有小钩的层析缸盖上，使滤纸下端浸入展开剂中。当展开剂的前沿位置达到距滤纸上端约12cm处时，小心取出滤纸趁湿用铅笔划出展开剂前沿位置，然后用电吹风吹干。注意：展开剂不要淹没滤纸上起点线，在起点线下1cm左右；起点线应与展开剂液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时层析缸封闭。注意事项实验过程中手不要接触滤纸中部。实验成败决定于点样的好坏，要求点的样直径不超过3mm。展开剂不要淹没滤纸上起点线；起点线应与展开剂液面平行；滤纸不要跟层析缸玻璃壁接触；展开时层析缸封闭。分别计算丙氨酸和亮氨酸的Rf值每人单独操作，样品层析滤纸附在实验报告上。1、Rf值的意义是什么？哪些因素会影响Rf值？2、在纸层析时，层析缸为什么要求尽量封闭？思考题1丙氨酸2混合液终点线起点线2cmAB边缘效应托尾现象展开剂选择不当流动相比例点样量展开剂蒸汽饱和程度