仪器的分析_张新荣_分子荧光光谱的分析法.pptVIP

三、定量分析 1. 标准曲线法 F c Fx cx 2. 直接比较法 如果荧光物质的标准曲线过零点，且线性良好，可用直接比较法测定。 第三节 仪器 一、仪器的构造及原理 仪器类型很多，基本结构相似，一般包括五部分：激发光源、单色器、样品池、检测器和记录显示部分。 1. 光源 能发射紫外到可见区波长的光、强度大、稳定。常用的有溴钨灯、高压汞灯、氙灯。 2. 单色器 两个单色器 3. 样品池 通常用石英制成 4. 检测器 光电倍增管 二、仪器类型 1. 光电荧光计 用滤光片作单色器（激发滤光片和荧光滤光片），溴钨灯或高压汞灯作光源，光电管为检测器。 2. 荧光分光光度计 用氙灯作光源、光栅作单色器，光电倍增管为检测器。可连续扫描激发光谱和荧光光谱。 第五节 荧光分析法的应用 （一） 有机物的荧光分析 由于荧光分析的高灵敏度、高选择性，使它在医学检验、卫生检验、药物分析、环境检测及食品分析等方面有广泛的应用。 芳香族及具有芳香结构的物质，在紫外光照射下能产生荧光。因此，荧光分析法可直接用于这类有机物的测定，如：多环胺类、萘酚类、嘌呤类、吲哚类、多环芳烃类、具有芳环或芳杂环结构的氨基酸及蛋白质等，约有200多种。 食品中维生素含量的测定是食品分析的常规项目，几乎所有种类的维生素都可以用荧光法进行分析。多环芳烃普遍存在于大气、水、土壤、动植物及加工食品中，大家所熟知的苯并[a]芘是致癌活性最强的一种，通过萃取或色谱分离后，可采用荧光法进行测定。该方法准确可靠，测定最低浓度可达 0.1 ?g/ml。 应用实例：食品中VB2（核黄素）的测定 其测定原理是VB2在440～500 nm波长的光照射下，发出黄绿色荧光，在波长525 nm下测定其荧光强度，在稀溶液中其荧光强度与VB2的浓度成正比。为消除试液中共存荧光杂质的干扰，可在测定过荧光强度的溶液中加入连二亚硫酸钠（Na2S2O4），将VB2还原为无荧光的物质，然后再测定试液中残余的荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中VB2的荧光强度。该方法被作为食品分析的国家标准分析方法。 （二） 无机元素的荧光分析 能产生荧光的无机物较少，对其进行分析通常是将待测元素与荧光试剂反应，生成具有荧光特性的配合物，进行间接测定。目前利用该法可进行荧光分析的无机元素已近70种。常见的有铬、铝、铍、硒、锗、镉等及部分稀土元素。 例如Al3+与桑色素或8-羟基喹啉的配合物就可产生荧光，从而用于铝的测定。有些元素虽不能与有机试剂形成能产生荧光的配合物，但它可使荧光物质的荧光熄灭。例如F-离子在一定pH的溶液中，能从Al3+与桑色素的荧光配合物中夺取Al3+，从而导致荧光配合物的荧光强度降低，其荧光强度与F-离子的浓度成反比，利用这一性质可间接测定样品中的氟离子含量。 应用实例：硒的测定 其测定原理是将样品用HNO3和HClO4湿式分解，硒被氧化成H2SeO4，再加HCl加热，还原为H2SeO3。在酸性溶液中Se(Ⅳ)与2,3-二氨基萘发生特异反应，生成能发荧光的4,5-苯并苤硒脑，用环己烷萃取后进行荧光测定。此方法灵敏度高，选择性好，是测定硒的国家标准分析方法。 （三）在生命科学中的应用 荧光分析法常用于临床测定生物样品中某些成分的含量，由于这些物质荧光量子产率较低，所以常用各种荧光探针来间接测定。荧光探针还被广泛应用于研究蛋白质大分子构象及构象动力学信息。此外，荧光光谱可用以研究 DNA的烷基化损伤与修复；荧光偏振、荧光猝灭及多维荧光检测技术可用来研究蛋白质与配体之间的相互作用及动力学；时间分辨荧光免疫技术越来越多地用于许多蛋白质、激素、病毒抗原乃至 DNA杂交体等的分析。总之，荧光分析法在生命科学领域中的应用前景十分广阔。 学习动物精神 11、机智应变的猴子：工作的流程有时往往是一成不变的，新人的优势在于不了解既有的做法，而能创造出新的创意与点子。一味 地接受工作的交付， 只能学到工作方法 的皮毛，能思考应 变的人，才会学到 方法的精髓。 学习动物精神 12、善解人意的海豚：常常问自己：我是主管该怎么办才能有助于更好的处理事情的方法。在工作上善解人意， 会减轻主管、共 事者的负担，也 让你更具人缘。 刚性平面结构：当荧光分子共轭程度相同时，分子的刚性和共平面性越大，荧光效率越大。 有些物质本身不发荧光或荧光较弱，但和金属离子形成配合物后，如果刚性和共平面性增加，就可以发荧光或增强荧光。如8-羟基喹啉是弱荧光物质，与Mg2+、Al3+ 等金属离子形成的配合物的荧光增强，利用这一特点可以间接测定金属离子。 取代基团 荧光分子上的各