实验二十五基因重组实验Ⅳ——重组体的筛选与鉴定.docVIP

实验二十五 基因重组实验Ⅳ——重组体的筛选与鉴定 [原理] 限制性内切核酸酶酶切鉴定：具体原理见实验二十一。 PCR反应鉴定：具体原理见实验十八。 [试剂] 1、DNA模板 2、引物 3、Taq DNA聚合酶 4、dNTPs（dATP、dGTP、dCTP、dTTP） 5、10×PCR 反应缓冲液：100mmol/L Tris-HCl pH 8.3，500mmol/L KCl，15mmol/L MgCl2，0.1%明胶 6、矿物油 超纯水 8、EcoR I酶解反应液（10×）: 1mol/L pH7.5 Tris-HCl , 0.5mol/L NaCl , 0.1mol/L MgCl2 。 9、Hind III酶解反应液（10×）：1mol/L pH7.4 Tris-HCl , 1mol/L NaCl , 0.07mol/L MgCl2 。 3.50×TAE 电泳缓冲液：称取242克Tris，加入57.1ml冰乙酸，100ml 0.5mol/L EDTA，调节pH至8.0，加蒸馏水至1000ml。 10、.凝胶加样缓冲液：0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯青FF、40%蔗糖水溶液（w/v）。 11、1%（1.5%）琼脂糖凝胶：1×TAE 100ml含1g（1.5g）琼脂糖。 [器材] 1、DNA扩增仪 2、电泳仪、电泳槽 3、微量