培训课件--抗球蛋白实验.pptVIP

抗球蛋白实验 主要内容 前 言 实验原理 实验方法 临床应用 注意事项 前 言 1908年，Carlo Moreschi首先描述该试验。 1945年，Coombs、Mourant和Race建立了抗球蛋白试验方法,故该试验又称为Coombs试验。 前 言 抗球蛋白试验中球蛋白指IgG、 C3片段、 C4片段、IgM、IgA等，但主要指IgG和C3片段。 IgG型抗体与红细胞表面相应抗原结合后致敏，但不产生可见的凝集反应，属不完全抗体。 IgG具有很好的免疫原性，用其免疫动物 （或通过杂交瘤技术）可获得相应抗体，即抗IgG（亦称抗抗体）。 抗球蛋白试验原理 待检红细胞（表 面可能包被有IgG 或C3片段等球蛋白） 待检血清（可能 含有IgG等球蛋白） 已知抗原 的红细胞 待检红细胞 （表面未知 的抗原） 已知抗体 的血清 产生可见 凝集反应 为阳性， 否则为阴 性。 抗 球 蛋 白 血 清 （ 广 谱 和 或 单 价 ） 桥联作用 致敏 分 类 直接抗球蛋白试验：检测红细胞表面是否结合IgG、C3片段等免疫球蛋白。 间接抗球蛋白试验：检测血清中是否含有IgG等免疫球蛋白。 直接抗球蛋白试验 检测红细胞上抗体（不完全抗体）： 试 剂 抗人球蛋白血清，分两类：广谱为抗IgG﹢抗C3抗体，单价分别为抗IgG抗体、抗C3抗体。 不完全抗D血清（IgG型）。 AB型血清。 5%RhD阳性红细胞悬液（3个人O型红细胞洗涤后制备）。 操作步骤 1、取受检查红细胞，以生理盐水洗涤3次，末次洗涤后，将上层盐水倒尽，再以滤纸将管口附着的盐水吸去，再配成5%红细胞盐水悬液(尽量除去血清，防止其含有的抗体产生干扰) 。 2、取上述5%受检者红细胞盐水悬液1滴，移入试管（10mm×60mm）内，加抗球蛋白血清1滴，混匀。 操作步骤 3、阳性对照：用不完全抗D血清致敏的5%RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。 4、阴性对照：正常人5%RhD阳性红细胞悬液1滴加抗球蛋白血清1滴，混匀。 5、受检者以及阳性、 阴性对照管同时以 1000rpm离心1min，轻轻摇动，观察结果。 间接抗球蛋白试验 检测血清中抗红细胞抗体（不完全抗体）： 操作步骤 反应物 受检管 阳性对照 阴性对照 血清（已知或受检） 2滴 - - 5%红细胞悬液（受检或已知） 1滴 - - IgG抗D血清 - 2滴 - AB型血清 - - 2滴 5%阳性红细胞悬液 - 1滴 1滴 操作步骤 1、取3支试管，按上表分别加入相应的细胞、血清和试剂，混匀，置37℃水浴1h（致敏），用生理盐水洗涤3次。末次洗涤后，将上清液除尽，并用滤纸将附着于管口的盐水吸去（尽量除去血清，防止其含有的抗体产生干扰） 。每管再各加生理盐水1滴，混匀。 2、每管各加适当浓度抗球蛋白血清1滴（桥联），混匀，1000rpm离心1min，观察结果。 结果判读 阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，受检管出现凝集者为阳性，不凝集者为阴性。如阳性对照出现红细胞不凝集或阴性出现红细胞凝集结果，应分析原因重做。 注意事项 离心过度，红细胞不易散开，容易导致假阳性。 红细胞洗涤时应迅速、连续，不应中途停止。 标本采集后最好立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞上丢失（直抗）。 抗球蛋白血清严格按说明书使用，否则可产生前带反应和后带反应，而误为阴性结果。 注意事项 红细胞上吸附抗体过少或Coombs试验阴性自身免疫性溶血性贫血直抗试验可呈假阴性反应。 全凝集或冷凝集血标本及脐带血标本含有Wharton胶，且洗涤不充分；血液标本中有很多网织红细胞，且抗球蛋白血清中含有抗运铁蛋白时，都可使红细胞产生凝集，出现假阳性。 阴性结果应核实：在试管中再加1滴IgG致敏红细胞，若阳性则表示试管内的抗球蛋白试剂确未被消耗，结果可靠。 抗球蛋白试验临床应用 新生儿溶血病（HDN）：胎儿红细胞已被母亲血型抗体（能通过胎盘的IgG型）致敏时。 自身免疫性溶血性贫血（AIHA）：自身抗体吸附在自身红细胞表面时。 溶血性输血反应：输入红细胞被受者不完全抗体致敏时。 药物性溶贫：甲基多巴类药物、青霉素等产生的不完全抗体吸附于红细胞时。 抗球蛋白试验其他技术 抗球蛋白试验可以加入不同的介质，其中包括低离子介质、牛白蛋白、聚乙二醇、酶等，其目的可增加反应的敏感性。 可使用微柱技术进行抗球蛋白试验，试验结果判断方便，且灵敏度高。 * *