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‘乔纳金’苹果及其脆肉变株的表型与分子鉴定 　　摘 要：以 ‘乔纳金’苹果品种为对照，从果实与叶片形态、果实硬度、脆度、香气成分等表型特征以及AFLP分子标记两个层面，对脆肉变株进行了鉴定。结果表明：①‘乔纳金’苹果与其脆肉变株果实与叶片形态基本一致，但脆肉变株的平均单果重仅是‘乔纳金’苹果的83.4%，而果实硬度与脆度分别是‘乔纳金’苹果的1.5倍和1.2倍，具有果实变小、硬度及脆度变大的特点；②两份材料果实香气成分种类总数基本一致，但‘乔纳金’苹果酯类成分种类多、含量高，而脆肉变株醇类和醛类成分种类多、含量高；③AFLP分子标记聚类分析将‘乔纳金’及其脆肉变株聚为一类。结论认为，该脆肉变株就是‘乔纳金’苹果的脆肉芽变。 　　关键词：乔纳金；脆肉变株；表型特征； AFLP分子标记 　　中图分类号：S661.102.7文献标识号：A文章编号：1001-4942（2013）09-0023-03 　　芽变是体细胞遗传物质的突变，而芽变选种是优中选优，是果树品种改良的有效途径之一，庞大的元帅系及富士系苹果品种群的形成就是一个很好的例证。因此，通过芽变选种，有力推动了苹果品种的升级换代和优化调整[1～5]。‘乔纳金’是以‘金冠’和‘红玉’为亲本杂交育成的三倍体苹果品种，果个大，品质优，深受欧美市场的消费者欢迎，但贮藏性较差，果实容易软化变绵，影响其产业发展；2004年在山东聊城某苹果园内发现一个‘乔纳金’脆肉变株，枝、叶、花、果的形态特征与‘乔纳金’基本一致，仅是变异株的果个变小、果肉变脆，很有可能是‘乔纳金’苹果的脆肉芽变株。为了进一步明确变异的真伪，本研究从表型及分子两个层面对该变株进行了鉴定，现将研究结果报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　试验于2008～2012年在山东农业大学作物生物学国家重点实验室进行。试材为采自山东省聊城市南郊郑管屯村苹果园的‘乔纳金’及其脆肉变株成熟果实。试验树立地条件一致，常规管理，生长结果正常。每个品种采果型端正、成熟度一致、无病虫害及机械损伤的30个果实及30片叶片，带回实验室进行各项指标的测定。 　　1.2 方法 　　1.2.1 果肉硬度与脆度及果实与叶片形态指标的测定 果实硬度和脆度采用马庆华等（2011）[6]的方法，用英国Stable Micro Systems公司生产的TA.XT plus质构仪，采用P/2n针状探头（直径2 mm），测前速度2 mm/s，贯入速度1 mm/s，测后速度5 mm/s，穿刺深度为8 mm，最小感知力为10 g。每次测定随机取5个果实，在阴阳两面测定；果实重量用百分之一天平测量，果实、叶片纵横径利用游标卡尺测量，测量10个样品作为重复。 　　1.2.2 果实香气成分测定 分别取‘乔纳金’及其变株异成熟果实，洗净切碎后准确称取40 g放入100 ml锥形瓶中，加入内标物3-壬酮（0.4 g/L） 5 μl，加盖封口后放在50℃磁力搅拌加热板上平衡10 min。将纤维萃取头插入250℃的GC进样口老化20 min后插入已平衡好的样品瓶中萃取35 min，然后插入GC进样口，230℃解吸2 min，进行GC-MS 检测。 　　气相色谱—质谱分析条件：参照陈美霞等（2005）[7]的方法并略做修改，利用Shimadzu GC/MS-QP2010气相色谱-质谱联用仪。色谱条件：色谱柱Rtx-1MS柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；进样口温度200℃；柱温：初始温度35℃保持2 min，以6℃/min升至120℃保持1 min，然后以10℃/min升至180℃后以20℃/min升至230℃保持5 min。质谱条件：载气为He，流量1.03 ml/min，电离方式EI，电子能量70 eV。离子源温度200℃，扫描质量范围：45～450 amu。进样：不分流进样。 　　定性方法：得到GC/MS分析总离子流图（TIC）后，经计算机检索同时与NIST05质谱库相匹配，并结合人工图谱解及资料分析，确认香味物质的各种化学成分。定量方法：按峰面积归一化法求得各成分的相对质量百分含量，并选择3-壬酮为内标进行定量。 　　1.2.3 AFLP分子标记鉴定 采用CTAB法提取‘乔纳金’及其脆肉变株等29个苹果品种（系）基因组DNA，荧光AFLP扩增采用苑兆和等（2009）[8]方法在北京鼎国生物技术有限责任公司进行，其中选择性扩增引物MseⅠ为FAM荧光标记引物，用 SHAN程序中的 UPGMA方法进行聚类分析，并通过 Tree plot模块生成聚类图。 　　2 结果与分析 　　2.1 ‘乔纳金’苹果及其脆肉变株果实与叶片指标的比较 　　‘乔纳金’苹果与其脆肉变株的果实和叶片形态基本一致（图1），果实均为扁圆形，叶片均为