第十一章体外受精嵌合体(医学课件).ppt

小鼠脾细胞制备 兔抗鼠抗血清制备 血清效价测定 胚胎的获取 嵌合胚制备 免疫手术及胚泡注射法小鼠嵌合体制备 小鼠脾细胞制备 选取健康小鼠 取出脾脏 过滤 匀浆 消毒皮肤 细胞计数 洗涤 兔抗鼠抗血清制备 注射小鼠脾细胞 107/只 选取健康兔5只 每周加强一次 最后一次免疫十天后心脏或动脉插管取血 血清分离及纯化 5次免疫后测效价 取条形板一块 每孔加生理盐水200μl 血清效价测定 将血清倍比稀释 取少量小鼠全血用生理盐水稀释至一毫升 每孔加等量小鼠血细胞 两小时后看结果 胚胎的获取 小鼠超排处理 手术取胚 胚胎质量鉴定 冲胚操作 胚胎体外培养 内细胞团分离 补体血清制备 透明带去除 抗体与滋胚层结合 抗血清灭活 补体结合 去除细胞碎片 嵌合胚制备 固定管及注射针的制备 操作方法的选择 胚胎及内细胞团的存放 三针法 单针法 (2)ICM重组法 为了解ICM的发育分化潜力及其影响因素，采用从受体囊胚中去掉原有的ICM，移入新的ICM，称为囊胚重组(Reconstitution of blastocyst)，或称ICM置换(ICM excheng)。其步骤见图。 18.3嵌合体鉴定 亦可称嵌合体标记(Markers of chimera)和嵌合体分析(Analysis of chimeras)，它是嵌合体制作的关键一步。不论是实验获得，还是自然产生的嵌合