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细菌通用引物在张家口地区奶牛乳房炎病原菌检测中的效用动植物检疫专业论文
学号：20071040115
河北北方学院毕业论文
细菌通用引物在张家口地区奶牛乳房炎
病原菌检测中的作用
Research in the Role of Universal Primer in Detecting
Pathogenic Bacteria of Cow Mastitis in Zhangjiakou
姓 名：谢佳
指导教师：张丽云
院 系：动物科技学院
专 业：动植物检疫专业
年 级：2007级
论文提交时间：2011年06月9日
目录
引言 3
1 材料与仪器 4
1.1 材料 4
1.1.1 标准菌以及培养基 4
1.1.2 PCR扩增 4
1.1.3 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 4
1.2 仪器 4
2 实验设计及检验方法 5
2.1 标准菌株的培养、鉴定和DNA提取 5
2.2样品DNA制备 5
2.3 PCR检测方法与步骤 5
2.3.1引物的设计和合成 5
2.3.2 PCR扩增 5
2.3.3检测PCR扩增产物 6
2.4通用引物扩增的广谱性试验 6
2.5细菌菌液灵敏度试验 6
2.6染色体稀释灵敏度试验 6
2.7特异性试验 6
3 结果和分析 7
3.1通用引物扩增的广谱性试验 7
3.2细菌菌液的灵敏度试验 8
3.3染色体稀释灵敏度试验 9
3.4特异性试验 10
讨论 11
结论 12
参考文献 13
致 谢 14
细菌通用引物在张家口地区奶牛乳房炎病原菌检测中的效用
谢佳
（河北北方学院动物科技学院动物医学系）
指导教师：张丽云
摘要：为了建立PCR直接检测奶牛乳房炎致病菌的方法,探索通用引物在奶牛乳房炎致病菌检测中的应用价值。利用16S rRNA基因的高度保守性,设计并合成细菌的通用引物,采用合成的引物扩增标准菌株及患有奶牛乳房炎的奶样。结果表明,通用引物扩增7种标准菌株,370 bp处均可得到清晰的电泳条带;通用引物PCR可检出250 ng/L的金黄色葡萄球菌标准菌株DNA;对患有奶牛乳房炎的奶样进行扩增,370 bp处也得到了清晰的电泳条带。建立在16S rRNA基础上的通用引物在奶牛乳房炎的检测中,初步显示具有特异、快速等优点,为进一步判断细菌的种类奠定了基础。
关键词:通用引物;聚合酶链反应;乳房炎
Research in the Role of Universal Primer in Detecting
Pathogenic Bacteria of Cow Mastitis in Zhangjiakou
Xie Jia
(Veterinary Medicine, Colloge of Animal Science and Technology, Hebei Northern University)
Guide Teacher: Zhang Liyun
Abstract: To establish a PCR method which could be used to directly detect pathogenic bacterial compo-nents in the milk of cow with mastitis and to explore the value of this method diagnosis,apair of universal primers for eubacteria targeting conserved region in 16S rRNA gene were designed. The primers were used to detect the milk of dairy cow with mastitis and seven sorts of bacteria.The sensitivity and specifity of this method were tested. Seven sorts of bacteria gave a visible band after amplication at 370 bp.The sensitivity test showed that the PCR amplication technique could detect 250ng/L of genomicStaphylococcus aureus. Amplifying the milk of dairy cow with mastitis,we also got a visible band. Universal primers based on 16Sr
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