斑马鱼TNFR2基因克隆及表达分析.docVIP

斑马鱼TNFR2基因克隆及表达分析 　　摘要：利用巢式PCR方法克隆斑马鱼（Danio rerio）肿瘤坏死因子受体2（TNFR2）基因，该基因全长1 242 bp，编码413个氨基酸，分子质量44.68 ku，等电点5.90。实时荧光定量PCR结果表明，TNFR2基因在斑马鱼胚胎发育时期的表达量呈现下降后趋于稳定，在斑马鱼不同组织中均能检测到，并且表达丰度差别不大，在肌肉中表达量最高，在肠道中表达量最低。 　　关键词：斑马鱼（Danio rerio）；肿瘤坏死因子受体2；实时荧光定量PCR 　　中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）17-4171-04 　　Cloning and Expressing Analysis of TNFR2 Gene of Zebrafish 　　QI Lin1，YU Ying-cai2，XIANG Zhi-ming3，LI Jun4 　　（1.Railway Police College， Zhengzhou 450053， China； 2.Department of Biochemistry，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004， China； 3.South China Sea Institute of Oceanology， Chinese Academy of Sciences， Guangzhou 510301， China； 　　4.School of Pharmaceutical， Liaocheng University， Liaocheng 252000， Shandong， China） 　　Abstract： Tumor necrosis factor receptor2（TNFR2） of zebrafish was isolated using nest PCR method. The gene was 1 242 bp，encoding 413 amino acids. The deduced molocular mass and pI was 44.68 ku and 5.90 respectively. The realtime qPCR results showed that TNFR2 gene was in“descent-stabilization” pattern during the development period. TNFR2 gene was expressed in different tissues of zebrafish， and highly expressed in muscle， lowly expressed in gut. 　　Key words： zebrafish（Danio rerio）； TNFR2； realtime qPCR 　　收稿日期：2013-02-18 　　基金项目：公安部科技创新项目（2012YYCXTDGZ139）。 　　作者简介：齐 麟（1981-），男，河南开封人，副教授，博士，主要从事分子生物学研究，（电话电子信箱）qilin@； 　　通讯作者，李 军，（电子信箱）think.a@163.com。 　　肿瘤坏死因子超家族（Tumor necrosis factor super family，TNFSF）是机体免疫反应的重要调节因子，调控炎症反应、细胞凋亡等诸多细胞应答进程[1]。肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor，TNF）是一类具有多种生物效应的细胞因子，自从1983年发现第一个TNF家族成员TNFα[2]，研究者已经鉴定了约20个肿瘤坏死因子。TNF通过与TNFR（TNFR1和TNFR2）结合而发挥了相应的生物学功能[3]。TNFR1和TNFR2都是Ⅰ型跨膜糖蛋白，在胞膜外存在约由40个氨基酸残基组成的富含半胱氨酸的结构域（Cystein rich domain，CRD）[4]。TNFR1在绝大多数细胞中表达，而TNFR2则主要在上皮细胞中表达[5]。TNFR1主要通过募集FADD和TRADD等分子传递信号[6]，而TNFR2则通过与TRAF家族结合传递信号[7]，最终都是激活NF-κB信号通路[8]。本研究通过巢式PCR方法克隆获得了斑马鱼（Danio rerio）TNFR2基因全长，并对其序列进行生物信息学进化分析。同时，通过实时荧光定量PCR（Realtime qPCR）对斑马鱼TNFR2基因在各个组织及受精后胚胎中进行表达谱分析，为后续研究奠定了基础。 　　1 材料与方法