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实验6.1红细胞比容的测定 [实验目的]?学习和掌握测定红细胞比容的方法。 [实验原理]? 将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中，定时、定速离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积）（图6.1-1）。 [实验对象]? 动物种类不限 [实验药品]? 草酸盐抗凝剂(0.8?g草酸钾·H2O?+?1.2?g草酸銨·H2O?+?甲醛1?ml?+?蒸馏水至100?ml)或10?g·L-1肝素，橡皮泥或半融化状态石蜡，75%酒精。 [仪器与器械]?? 毛细玻璃管（内径1.8?mm，长75?mm）或温氏分血管,酒精灯，水平式高速毛细管离心机(或普通离心机)，天平，注射器，长针头，干棉球，刻度尺（精确到mm）。 [实验方法与步骤]? 　1.微量毛细管比容法 （1）以抗凝剂湿润毛细管内壁后吹出，让壁内自然风干或于60?℃～80℃干燥箱内干燥后待用。 （2）取血：常规消毒，穿刺指（或尾）尖，让血自动流出，用棉球擦去第一滴血，待第二滴血流出后，将毛细管的一端水平接触血滴，利用虹吸现象使血液进入毛细管的2/3（约50?mm）处。 （3）离心：用酒精灯溶封或橡皮泥、石蜡封堵其未吸血端，然后封端向外放入专用的水平式毛细管离心机，以12000?r·min-1的速度离心5?min。届时用刻度尺分别量出红细胞柱和全血柱高度（单位?mm）。计算其比值，即得出红细胞比容。 　　2.温氏分血管比容法 （1）取大试管和温氏分血管各一支，用抗凝剂处理后烘干备用。（2）取血：可采取静脉取血或心脏取血，将血液沿大试管壁缓慢放入管内，用涂有凡仕林的大拇指堵住试管口，缓慢颠倒试管2～3次，让血液与抗凝剂充分混匀，并不能使血细胞破碎，制成抗凝血。 用带有长注针头的注射器，取抗凝血2?ml将其插入分血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，使血液精确到10?cm刻度处。 （3）离心：将分血管以3000?r·min-1离心30?min，取出分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速离心5?min，再读取红细胞柱的高度，如果记录相同，该读数的1/10即为红细胞比容。 [注意事项]? 1.选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、溶解。草酸钾使红细胞皱缩，而草酸銨使红细胞膨胀，二者配合使用可互相缓解。鱼类多用肝素抗凝。 2.血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧烈引起红细胞破裂。 3.用抗凝剂湿润的毛细玻璃管（或温氏分血管）内壁后要充分干燥。血液进入毛细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有气泡。 [实验结果] 报告该实验动物的红细胞比容。并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示 [思考题] 1.在那些情况下，红细胞的比容明显增加。 2.测定红细胞比容时，一种常出现的误差来源是什么？误差倾向于增加还是减少？ 3.测定红细胞比容的实际意义是什么？? 实验6.9 ABO血型鉴定和交叉配血实验 [实验目的]?观察红细胞凝集现象。 学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。 [实验原理]?ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。 　　同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。 [实验对象]?? 正常人。 [实验药品]???A型B型标准血清。 [仪器器械]?? 双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜。?[实验方法与步骤] 1.ABO血型的鉴定：?（1）取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。 （2）在A端和B端的凹面中分别滴上相应标准血清少许。 （3）75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血（也可用红细胞悬浮液，见下述），分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2?min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。（4）根据凝集现象的有无判断血型（图6.9-1）。 　2.交叉配血实验 （1）分别对供血动物和受血动物消毒、静脉取血，制备成血清和红