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选修三现代生物科技专题 基因工程基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，又叫做DNA重组技术。 基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（1）来源：主要原核生物。（2）功能：，因此具有专一性。（3）结果：黏性末端和平末端。2.“分子缝合针”——DNA连接酶(1)两种连接酶比较：E·coliDNA连接酶将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。(2)与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸片段，形成磷酸二酯键DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。3.“分子运输车”——载体（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（2）最常用的载体质粒,它是一双链环状DNA分子。（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒(二)基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 。2.获取目的基因的方法： 基因组文库：限制酶 大 有启动子内含子 从基因文库中获取目的基因： cDNA文库：反转录法 小 无启动子内含子 PCR技术扩增目的基因（1）原理：DNA双链复制（2）过程：人工合成有反转录法_和化学