雞毒害艾美尔球虫早熟耐药株的诱导及生物学特性研究(原件).docVIP

鸡E.necatrix早熟耐药株的诱导 及生物学特性研究 摘要 为了研制既具有良好的免疫原性，又不受具有抗球虫作用的抗菌类药物影响的高效球虫疫苗，以鸡E.necatrix早熟株（P8）为母株，采用药物浓度递增法，诱导出对土霉素、制菌磺的早熟耐药株，进一步交叉耐药性诱导获得交叉早熟耐药株，测定了早熟耐药株的致病性、内生发育、繁殖力和免疫原性，并对早熟耐药株的免疫特性进行了研究。试验结果表明： （1）用E.necatrix P8为母株，成功诱导出对土霉素1600mg/kg饲料产生抗药性的毒害艾美耳球虫株，对制菌磺2000mg/kg饲料产生抗药性的毒害艾美耳球虫株，通过交叉耐药诱导获得对制菌磺1800mg/kg饲料及土霉素1600mg/kg饲料均产生抗药性的交叉早熟耐药虫株。 （2）将E.necatrix早熟耐药株与P8、P0的生物学特性进行比较，结果表明：①早熟耐药株攻毒剂量小于5×10 4个/只时，无血便，病变轻微，小于21×10 4个/只时不引起鸡只死亡，早熟耐药株、P840×10 4个/只时致病力与P013×10 4个/只的致病力相当，死亡率分别为43.33%、53.33%、40%，；②接种早熟耐药株72h第一代裂殖体发育成熟，96h出现成熟的第二代裂殖体，108h数量达到高峰，第一、二代裂殖体与P8大小无明显差异，较P0出现早且变小，120裂殖体数量下降，至132h左右可见大、小配子体、及少量合子；在140.5h的盲肠粘膜涂片上有卵囊形成，在156h时卵囊产量达高峰，比P0提前；③接种剂量0.5×104个/只时，早熟耐药株达到产卵高峰，当接种大于0.5×104时产卵总量呈现下降趋势，每个卵囊的繁殖力则随着接种剂量的增加而减少；剂量0.01×104个/只时每个卵囊的繁殖能力最大，早熟耐药株的繁殖能力分别是P8和P0的88.74%、58.35%；④用300个/只孢子化早熟耐药株卵囊免疫7日龄雏鸡，免疫后14d以以1×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒，早熟耐药株卵囊减少率为79.77%；以10×104个P0孢子化的卵囊进行攻毒早熟耐药株病变记分降低率为78.42%，且平均病变记分≤1，血便记分≤1，鸡只无死亡，与P8、P0的免疫力相当。总体看来，早熟耐药株的生物学特性与P8无明显差异，与P0差异显著，其致病性大大降低，繁殖力有所减弱，且保持了免疫原性不变的特点。 （6）为确定E.necatrix早熟耐药株的最小免疫剂量，以不同剂量对雏鸡于4日龄进行了一次和14日龄二次免疫，结果表明：①免疫剂量越大，产生的免疫保护力越大，对雏鸡体增重的不良影响也越大。一次免疫剂量200个/只和二次免疫剂量400个/只，可达良好的免疫保护效果，确定为最小免疫剂量；②以最小免疫剂量分别对雏鸡进行一次免疫和二次免疫，分别于免疫后第7d、3d可获得完全保护，能够抵抗P0的攻击；③饲料中添加浓度为1800mg/kg制菌磺和1600mg/kg土霉素时，最小免疫剂量为首免300个/只，二免600个/只。 （4）E.necatrix早熟耐药株于4℃条件下保存，保存15个月时卵囊仍然有活力，随着保存时间的延长，卵囊活力逐渐降低，平均每个月卵囊活力下降6.13%。E.necatrix早熟耐药株作为疫苗株保存1年时，最小免疫剂量为首免800个/只，二免1600个/只。 关键词：E.necatrix亲本株（P0）；早熟株（P8）；早熟耐药株；土霉素；制菌磺；生物学特性；疫苗特性； 前 言 鸡球虫病是球虫卵囊寄生于鸡肠道黏膜上皮内引起的一种原虫病[1]，是造成现代养禽业经济损失最大的疾病之一，全球每年因该病引起的损失高达80亿美元[2]，我国年养肉鸡数为30亿羽～60亿羽，每年用于抗球虫药的费用高达6亿～18亿元人民币[3]。报道的有9种球虫，其中作为病原体而引起重视的有柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)、毒害艾美耳球虫（E.necatrix）、堆型艾美耳球虫（E.acervulina）、巨型艾美耳球虫（E. maxima）、布氏艾美耳球虫（E. brunetti）五种，其中毒害艾美尔球虫（E.necatrix）是9种鸡球虫中致病力最强的虫种之一，其无性生殖阶段可导致鸡的中后段肠上皮细胞大量破坏和严重出血，影响营养物质的吸收并易引起继发性坏死肠炎，常导致巨大的经济损失[4]。 目前，在养鸡业中，现阶段防治鸡球虫病的主要手段是使用抗球虫药进行化学防治。化学防治对控制鸡球虫病的爆发和流行、减少养鸡业的经济损失起到了十分重要的作用。但是，药物防治面临着日益严重的三大问题的困扰：耐药虫株的迅速出现[5,6] ，几乎所有的抗球虫药均有耐药虫株的出现，且表现出对与该药同类或作用机理相同的其他药物产生一定程度的交叉耐药性[7]；药物残留问题，在日益关注食品安全背景下，无残留食品的生产