4.2DNA扩增.pptVIP

自学提纲： 知识回顾： 1.DNA分子的结构（外侧、内侧、基本单位）；2. DNA复制过程和特点； 3.PCR技术概念及应用。 基本概念：变性、复性、Taq DNA聚合酶、引物 理解PCR技术的原理 掌握PCR技术的全过程 比较PCR技术和体内DNA复制的异同点。 一 、PCR技术的原理 利用DNA分子的热变性原理，通过控 制温度来控制双链的解聚与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。 体外DNA复制的条件： 四种脱氧核苷酸、耐高温的聚合酶、引物、 模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。 复制的方向：子链的5’ 端向 3’端延伸。 二、PCR的反应过程 三、实验步骤： 注意事项：详见操作提示 * * 课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 1、DNA分子的3’ 端与5’ 端 -OH端为3’ ; 磷酸基团的末端为5’ 。 2、DNA分子由两条反向平行的脱氧核苷酸链根据碱基互补配对原则形成氢键连接而成。 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物（ RNA） 打开DNA双链 模板 合成子链原料 催化子链合成 使DNA聚合酶能从引物3’端开始连接脱氧核苷酸 思考：3、体内DNA复制的条件是什么？ 体外扩增DNA 如何提供相似环境？ 变性（ 80-100℃ ） Taq聚合酶（耐高温） 15—30个核苷酸构