动物肝脏DNA提取和鉴定-实验技术试卷.pptVIP

核酸含量的测定方法：紫外吸收法、定磷法和分别针对DNA和RNA的颜色反应方法。 脱氧核糖核酸中的脱氧核糖在酸性环境中变成ω-羟基-γ-酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物，在595nm处有最大的吸收 。 DNA20~400微克范围内，光密度与DNA的浓度成正比，在反应液中加入少量乙醛，可以提高反应的灵敏度。 三、实验试剂 95%冷乙醇、NaCl固体 二苯胺：称取纯二苯胺1g溶于100ml冰醋酸中，加入10ml过氯酸，混匀。临用时加1ml1.6%乙醛溶液，所配置试剂应为无色。 0.14mol／L NaCl－0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液(PH=6.8) DNA标准液200ug/ml:DNA钠盐用5mmol/L的NaOH配制。 氯仿/异戊醇=20：1（V/V） 5% SDS 组织捣碎匀浆机 猪肝8g 匀 浆 16ml的0.14mol／L NaCl－0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液 离心，4000r/min ,10min 上清（弃掉） 沉淀 沉淀 25ml缓冲液洗涤 离心，4000r/min ,20min 上清（弃掉） 40ml的0.14mol／L NaCl－0.05mol／L 柠檬酸钠缓冲液 沉淀 21ml氯仿/异戊醇 4ml 5% SDS 振荡 30 min（保鲜膜封口） 加入3.6gNaCl 固体，终浓度为1mol/L 离心，3500r/min ,