2016-3基因突变和损伤DNA的修复.pptVIP

b) 非电离辐射—Ultra Violet light (U.V) ---pyrimidine dimer (TT dimer )is generated by covalent links between adjacent TT ∧ 2-2生物技术定点诱变 PCR原理 解链 退火 延伸 基因的定点诱变 oligo-dNt 介导的定点诱变 合成与目标基因某区段互补 并含突变 位点的oligo-dNt 突变oligo-dNt引物介导的PCR诱变 目标基因克隆到质粒中 分为两管 每管加入2个特定引物 一个与基因内某一区段互补（2，4） 一个含突变碱基并与欲突变位点互补（1，3） PCR产物 混合变性、复性 转化E.coli Pfu DNApolymerase from Pyrococus furiosus(火球菌属) 具有3’ → 5’exonuclease 活性， 校正复制时碱基的错配 复制高保真，聚合长度1.5-2.0kb 两引物5’ 端连接 其中引物1中含欲突变的碱基 Pfu-PCR直接诱变法 引物2合成的新生链不会使引物1靶序列发生 替代 未被引物2扩增的DNA，含有未突变的酶切位点，经酶解后成线状，转化E.coli不能稳定存在 改进型 引物的PCR诱变 目标基因克隆到M13载体