稀释平板计数法浅析.pptVIP

实验二土壤中好气性细菌、真菌及放线菌的分离与计数 一、目的与要求： 1、了解微生物的分离与纯化原理。 2、学习无菌操作技术。 3、了解活菌计数法要点。 二、实验原理 微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 细菌数量大于放线菌，真菌量最少 三、操作步骤 1 样品稀释液的制备 准确称取待测土壤10g，放入装有90mL无菌水并放有小玻璃珠的250mL三角瓶中，用手摇匀，使微生物细胞分散，静置约20-30s，即10-1稀释液；再用移液枪吸取10-1稀释液1mL装入有9mL无菌水的试管中，依次类推，连续稀释，制成10-4 、10-5、 10-6 、10-7等一系列稀释度菌液，供平板接种用。 2 平板接种培养 （1）稀释倒平板法（pour plate method） 无菌吸管按无菌操作要求吸取不同稀释液1mL，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过的培养皿中。 （2）涂布平板法（spread plate method） 先将已熔化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃棒将菌液均匀分散至整个平板表面。 （3）平板划