普通遗传学第十七章 因组(自学) 自出试题及答案详解第二套.docVIP

一、名词解释： 1、基因： 2、基因组 基因工程： 载体： 转化： 感染： 转导： 递遗传物质感染转移 1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？ 3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？ 4、什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？ 5、细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同？在基因工程中有什么用途？ 6、YAC载体具有什么样的功能性DNA序列？为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性？ 7、列举质粒载体必须具备的4个基本特性。 8、PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？ 9、cDNA克隆与基因组克隆有何不同？ 10、怎样将一个平末端DNA片段插入到EcoR I限制位点中去？ 11.什么是Western印迹？它与Southern印迹有什么不同 11、什么是蓝白斑筛选法？ 12、什么是基因文库？ 13、黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。 14、什么是同聚物加尾连接法？用何种方法加尾？具有哪些优缺点？ 15、何谓接头连接法？ 答案 一、名词解释： 1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。 2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部分子～～是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。 能载带微量物质共同参与某种化学或物理过程的常量物质，在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。由噬菌体将一个细胞的基因传递给另一细胞的过程。它是细菌之间传递遗传物质的方式之一。其具体含义是指一个细胞的DNA或RNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中。1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,… 等,用正体. 2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？ 答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星活性。? ???概括起来，诱发星活性的因素有如下几种： (1)高甘油含量(5％,?v／v)； (2)限制性内切核酸酶用量过高(100U／ugDNA)； (3)低离子强度(25?mmol／L)； (4)高pH(8.0以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等； (6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？ 答：（1）DNA的纯度 （2）DNA甲基化的程度 （3）酶切消化反应的温度 （4）DNA的分子结构 （5）核酸内切限制酶的缓冲液4、什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？ 答：Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，它具有5-3聚合酶和3-5外切核酸酶的活性，小片段具有5-3外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5引物的5-3外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。 Klenow酶主要有下列用途： (1)修复反应，制备平末端 可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5或3突出末端，制备平末端，这样