构建含肿瘤坏死因子相凋亡诱导配体基因慢病毒载体.docVIP

构建含肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因慢病毒载体 张 海，蒋正方，刘 阳，张 波，吴贵强，曾令勇(绵阳市第三人民医院神经外科，四川省绵阳市 621000) 文章亮点： 实验创新性采用大肠杆菌同源重组法构建出含有肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因的慢病毒载体，并对其进行鉴定，发现该基因慢病毒载体的构建是方便可行的，包装体系也是成熟的，可为后续把肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体转导进神经干细胞进行基因治疗奠定基础。 关键词： 组织构建；组织工程；肿瘤坏死因子；相关凋亡诱导配体基因；慢病毒载体；重组质粒；PCR；Western blot 主题词： TNF相关凋亡诱导配体；基因；质粒；聚合酶链反应；印迹法，蛋白质 摘要 背景：腺病毒的表达时间有限，会限制目的基因的表达时间和表达量，不利于实验的持续进行，故文章选择慢病毒作为载体，与目的基因大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因片段进行基因重组。 目的：探讨构建含有大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因慢病毒载体的方法。 方法：根据GenBank中大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体序列(NM 145681.1)，设计出该基因的特异性引物Trail-AgeⅠ-F和Trail-AgeⅠ-R，用PCR法从大鼠cDNA文库中扩增出目的基因，AgeⅠ酶切将该基因克隆入真核表达载体GV218中，产生目的重组质粒，用脂质体 Lipofeetami