膜片钳实验与技术.pptVIP

激光共聚焦与膜片钳相结合方法 重组DNA克隆与膜片钳相结合法 全细胞电流记录 　　全细胞记录是膜片钳四种基本模式之一。尽管它记录的是细胞膜多个离子通道开放产生的宏膜电流，但由于该模式既可以对离子通道的性质和分类进行宏观性质的分析，也可以对离子通道的构造、分布与功能进行微观性质的分析，从而使其成为当前电生理研究中应用最广泛的一种模式。 　　全细胞记录模式可用于测定在某个时间和电压情况下，离子通道电流的大小，观察其电压依赖性特征，如以膜电位为横座标，电流强度为纵座标，则可绘制出电流-电压关系曲线（I-V曲线）。在电流为零时的膜电位被称为反转电位。 I-V曲线和反转电位反映了某种通道的电压依赖性及药物等因素对通道电压依赖性的影响，常作为全细胞记录模式结果分析的指标之一。 　　  　 钠通道的激活是电压门控的，当细胞膜去极化至-60mV左右时，即可引起膜上大量钠通道激活，产生一迅速激活并迅速失活的内向电流，当去极化至-30 mV左右时达到最大，反转电位为+30 mV左右。在参数设计上应使保持电位钳制在-80 mV以下，此时给予不同程度的去极化阶跃电压，则可得到钠电流，由于钠通道激活和失活均很快，因此刺激脉冲波宽常为20~50 ms。 钠通道电流的测定 　 为证实所测电流为钠电流，常借助于工具药，如河豚素（TTX）用于细胞外液中，可以选择性阻断钠通道。由于神经与心脏中的钠