实时定量PCR技术讲义.ppt

实时定量PCR技术 目录 实时定量 PCR介绍 荧光PCR实验设计 Quantitative Real-time PCR技术的应用 PCR PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法。由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。 实时定量 PCR 实时定量 PCR (Quantitative real-time PCR) 是1996年由美国Applied Biosystems公司推出的一种新技术。是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 基本原理 实时荧光定量 PCR 是在反应体系中加入荧光基团，使产物的数量与检测到的荧光强度成线性关系，从而得出产物的扩增曲线。理想的扩增曲线应为J 型，符合2 N 方程(其中 N 为 PCR 的循环次数)，但实际上扩增曲线为 S 型。 主要类型 Taqman 探针法 Taqman 探针法 SYBR Green 法 SYBR Green 法 熔解曲线 荧光PCR实验设计 实验操作注意事项 Real-time PCR引物设计原则 Taqma